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大腸菌の蛋白質分泌における膜リン脂質の挙動と寄与の分子レベル解析

膜磷脂在大肠杆菌蛋白质分泌中的行为和贡献的分子水平分析

基本信息

批准号：
03264202
负责人：
渋谷勲
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Saitama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

大腸菌の蛋白質分泌における膜リン脂質の挙動と寄与を分子レベルで解析するため,(1)リン脂質組成をさまざまに改変するための変異株群の構築,(2)これらの株におけるTEMβ‐ラクタマ-ゼの分泌能の解析,及び(3)酸性リン脂質合成欠損変異の細胞致死性の外膜主要リポ蛋白欠損による抑制現象の分子機序の解析,をそれぞれ次のように行った。(1)遺伝背景統一のためW3110株から出発し,酸性リン脂質合成欠損変異pgsA3(lpp‐2変異と共存),カルジオリピン合成酵素完全欠損変異cls::kan,ホスファチジルセリンシンタ-ゼ温度感受性変異pssA1の各変異を単独及び組み合わせて保持する株,並びにこれらの野生型遺伝子の発現増幅プラスミド保持株を構築した。(2)TEMβ‐ラクタマ-ゼ遺伝子をラクト-スオペロンプロモ-タ-の支配下においた多コピ-プラスミド及びラクト-スオペロンリプレッサ-遺伝子を持つプラスミドの両者をpgsA3変異株に保持させ,IPTGで誘導すると,対象野生型株に比べβ‐ラクタマ-ゼ前駆体が顕著に蓄積することを見いだした。抗β‐ラクタマ-ゼ抗体を用いるこの系の分析条件を確立した。(3)pgsA3変異を培養条件によって許容するlpp^+株を見いだし,酸性リン脂質合成欠損時の外膜主要リポ蛋白の分泌過程を調べた。その結果,プロリポ蛋白の修飾及びシグナル切断はほぼ正常に起こるが,グリセリド修飾の速度が低下していること,この低下はpssA1変異により改善され,pssA遺伝子の増幅発現により増大することを見いだした。lpp欠損以外にpgsA3の致死性を抑制する変異の検索も行い,酸性リン脂質合成改善以外の変異は調べた限り無効で,リポ蛋白に極めて特異的であることが分かった。

Escherichia coli's protein secretion and membrane lipid analysis and molecular analysis, (1 ) Lipid composition of リンをさまざまに椉するための変different strain group の structure, (2) これらの strain におけるT Analysis of EMβ-ラクタマ-ゼのsecretory energy, and (3) acidic lipoprotein synthesis-impaired cell lethality Analysis of the molecular sequence of the main リポ protein deficiency in the outer membrane and inhibition of the phenomenon, をそれぞれ时のように行った. (1) Inherited background unified W3110 strain から出発し, acidic リン lipid synthesis defective divergent pgsA3 (lpp-2 divergent coexistence), カルジオリピン synthetic enzyme complete defective divergent cls::kan,ホスファチジルセリンシンタ-ゼTemperature Sensitivity Changing Differentiation pssA1のeach type of different type and group combination The せて maintains the する strain, and the びにこれらのwild-type legacy 伝子の発appears to increase the プラスミド maintains the strain をconstructs した. (2) TEMβ-ラクタマ-ゼ伝子をラクト-スオペロンプロモ-タ-のcontrol下においた多コピ-プラスミド和びラクト-スオペロンリプレッサ-缝子を志つプラスミドの両者をpgsA3剉different strainにmaintenanceさせ,IPTGでinducingすると,対Like the wild-type strain, it's better than the β-ラクタマ-ゼ前槆体が鍕敕综合することを见いだした. The anti-β-ラクタマ-ゼantibody was established using the analytical conditions of the いるこの-system. (3) The culture conditions of pgsA3 are different, and the secretion process of the outer membrane main protein when the synthesis of acidic lipids is impaired.その results, modification of プロリポprotein and びシグナル cutting はほぼnormal にこるが, グリセリドmodification のspeed がlow していること, このlower はpssA1変different によりimproving され, pssA 伝子のincreasing width 発appears により嗗大することを见いだした. In addition to lpp deficiency, pgsA3's lethality inhibits acidic lipid synthesis and acidic lipid synthesis. Except for the improvement, the difference is that the adjustment is limited and the effect is ineffective.