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セリン:ピルビン酸アミノ転移酵素のオルガネラ局在機構に関する研究

丝氨酸丙酮酸转氨酶细胞器定位机制研究

基本信息

批准号：
60214015
负责人：
市山新
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

[研究目的] ラット肝臓のセリン:ピルビン酸アミノ転移酵素(SPT)はミトコンドリア(Mt)とペルオキシゾーム(Ps)に局在し、MtとPsのSPTは異なるmRNAに由来する。MtのSPTに対するcDNAクローンの単離には既に成功したので、本研究では、構造比較のため、PsのSPTに対するcDNAのクローニングとその構造解析を目的とした。[研究実績] 1.cDNAバンクの作製及びスクリーニング:正常ラット肝ポリ(A)RNAを鋳型として、岡山・バークの方法によりcDNAバンクを作成した。コロニーハイブリダイゼーションはMtのSPTに対するcDNAクローン(pRspt10)のPstI切断による約900塩基対のフラグメントを用いて行った。いくつかの実験から、このフラグメントはPs-SPTのmRNAと相同性を持っことが示唆されていた。約12万の形質変換菌をスクリーニングした結果、制限酵素による切断形式がMt-SPTに対するクローンとは異なる2個のクローンを得た。2.制限酵素地図の作製及び塩基配列の解析:この2個のクローンは長じ長さのインサートを含み、制限酵素による切断パターンも同じであったので、そのうちの1つ、pRspt216について詳細な制限酵素地図を作成した。それをMt型クローンのものと比較したところ、インサートの3′末端側半分はほとんど同じであったが、5′末端側半分はまったく異っていた。このことは塩基配列の決定(約9割完了)により更に確認された。すなわち、pRspt216の3′末端側約950塩基の配列は、間に62塩基の特異配列が存在すること以外は、Mt型クローンの3′末端側塩基配列と完全に一致していた。一方、5′末端側約850塩基については両者でまったく異なっていた。pRspt216はおそらくPs-SPTに対応するcDNAクローンと思われるが、現在その確認を行いつつある。

[Objective] The origin of SPT mRNA is related to the expression of T and Ps in the liver. This study aims at structural comparison and structural analysis of SPT cDNA. [Results] 1. cDNA library preparation and development: Normal RNA library (A)RNA library preparation and development The PstI cleavage of pRspt10 is about 900 bp. The mRNA identity of Ps-SPT was detected by PCR. About 120,000 species of mutant bacteria were isolated from two different species of mutant bacteria. 2. Analysis of restriction enzyme site operation and matrix arrangement: The two types of restriction enzyme site operation include: restriction enzyme site operation; restriction enzyme site operation. The difference between the two sides is that the two sides are different. This is the first time that we've seen this. In addition to the existence of a specific nucleotide alignment at the 3′ end of pRspt216, the nucleotide alignment at the 3′ end of pRspt216 is completely consistent with that at the 3′ end of pRspt216. One side, 5′ end side about 850 pRspt216 is a Ps-SPT cDNA library, and now it is a confirmation library.