Aquaporins: search for AQP-6 in the inner ear, expression, characterization, regulation of AQP-2

水通道蛋白：在内耳中寻找 AQP-6，AQP-2 的表达、表征和调节

• 批准号: 5211568
• 负责人: Professor Dr. Eric Beitz
• 金额: --
• 依托单位: Pharmazeutisches Institut
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Fellowships
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 1998-12-31 至 2000-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5211568?language=en
• 关键词: Aquaporins; search; AQP; inner; ear

Zelluläre Wasserkanäle, Aquaporine (AQP), ermöglichen einen schnellen und regulierbaren Transport selektiv von Wasser und kleinen ungeladenen Molekülen über Zellmembranen entsprechend dem osmotischen Gradienten. Im Sammelrohr der Niere befindet sich Vasopressin reguliertes AQP-2, dessen Mutation nephrogenen Diabetes insipidus auslöst. Eine Dysregulation u.a. des Endolymphvolumens im Innenohr ist Ursache für Schwindel und Hörverlust (Morbus Ménière). Wir haben AQP-2 (neben AQP-1, -3, -4 und -5) und den V2-Vasopressinrezeptor im Innenohr nachgewiesen. Der Vasopressineffekt im Innenohr ist jedoch invers zum Sammelrohr, d.h. AQP-2 wird negativ reguliert. Ich möchte die Bedeutung der AQPe für die Innenohrfunktion weiter untersuchen durch: 1) Suche nach dem bislang nierenspezifischen AQP-6 mit RT-PCR und, falls vorhanden, Hefeexpression und Charakterisierung. 2) Identifizierung regulativer Proteine des AQP-2 durch Chromatographie an mit phosphoryliertem AQP-2 gekoppelten Affinitätsmaterial und Immunpräzipitation von AQP-2-Proteinkomplexen. AQP-2 wird mit N-terminalem myc-tag in Hefe exprimiert, gereinigt und mit Sammelrohr-Zelllysat homogenisiert. Komplexe werden mit anti-myc-Antikörpern gefällt und isolierte Proteine ansequenziert.

Zelluläre Wasserkanäle，Aquaporine（AQP），ermöglichen einen schnellen und regulierbaren Transport selektiv von瓦塞尔und kleinen ungeladenen Molekülen über Zellmembrane entsprechend dem martischen elenten.在Niere的Sammelrohr发现加压素调节AQP-2，导致尿崩症的肾突变。一种失调des Endolymphvolumens im Innenohr ist Ursache für Schwindel und Hörverlust（Morbus Ménière）.我们有AQP-2（包括AQP-1、AQP-3、AQP-4和AQP-5）和V2-血管加压素受体。血管加压素在体内的作用与Sammelrohr，d.h. AQP-2呈阴性。我想通过以下方法来研究AQPe的体内功能：1）用RT-PCR方法对AQP 6进行特异性检测，结果显示，其福尔斯的表达和特性均较好。2)通过磷酸化AQP-2亲和材料和AQP-2-蛋白复合物免疫纯化的色谱法鉴定AQP-2调节蛋白。AQP-2在Hefe explored、generinigt和Sammelrohr-Zelllysat均质化中带有N-末端myc-标签。复合物可通过抗myc-Antikörpern gefällt和isolierte Proteine ansequenziert进行测定。