Aquaporins: search for AQP-6 in the inner ear, expression, characterization, regulation of AQP-2

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Zelluläre Wasserkanäle, Aquaporine (AQP), ermöglichen einen schnellen und regulierbaren Transport selektiv von Wasser und kleinen ungeladenen Molekülen über Zellmembranen entsprechend dem osmotischen Gradienten. Im Sammelrohr der Niere befindet sich Vasopressin reguliertes AQP-2, dessen Mutation nephrogenen Diabetes insipidus auslöst. Eine Dysregulation u.a. des Endolymphvolumens im Innenohr ist Ursache für Schwindel und Hörverlust (Morbus Ménière). Wir haben AQP-2 (neben AQP-1, -3, -4 und -5) und den V2-Vasopressinrezeptor im Innenohr nachgewiesen. Der Vasopressineffekt im Innenohr ist jedoch invers zum Sammelrohr, d.h. AQP-2 wird negativ reguliert. Ich möchte die Bedeutung der AQPe für die Innenohrfunktion weiter untersuchen durch: 1) Suche nach dem bislang nierenspezifischen AQP-6 mit RT-PCR und, falls vorhanden, Hefeexpression und Charakterisierung. 2) Identifizierung regulativer Proteine des AQP-2 durch Chromatographie an mit phosphoryliertem AQP-2 gekoppelten Affinitätsmaterial und Immunpräzipitation von AQP-2-Proteinkomplexen. AQP-2 wird mit N-terminalem myc-tag in Hefe exprimiert, gereinigt und mit Sammelrohr-Zelllysat homogenisiert. Komplexe werden mit anti-myc-Antikörpern gefällt und isolierte Proteine ansequenziert.