Biochemische und elektrophysiologische Charakterisierung des Aquaporin-Kationenfilters

水通道蛋白阳离子过滤器的生化和电生理学表征

• 批准号: 34732999
• 负责人: Professor Dr. Eric Beitz
• 金额: --
• 依托单位: Pharmazeutisches Institut
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2006-12-31 至 2010-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/34732999?language=en
• 关键词: Biochemische; und; elektrophysiologische; Charakterisierung; des

Wir haben durch wenige (1–3) Punktmutationen in Aquaporinen physiologisch relevante Leitfähigkeiten für Protonen, Ammonium, Kalium- bzw. Natriumionen erzeugt. Es ist also erstmals gelungen, den Aquaporin-Kationenfilter im Protein zu lokalisieren und zu zerstören. Beteiligt ist nicht nur die zentrale Porenregion (Asparagin-Prolin-Alanin-Sequenzmotiv) sondern auch die Engstelle am Poreneingang (aromatische Arginin-Region). Diese experimentellen Daten ermöglichen es nun, die existierenden theoretischen Modelle, die meist die zentrale Region allein für den Kationenausschluss verantwortlich machen, zu überprüfen. In der Fortsetzungsphase des Projekts werden wir die erhaltenen Aquaporin-Mutanten u.a. von Säuger-AQP1, Toxoplasma TgAQP und Plasmodium PfAQP in geeigneten Zellen (E. coli, Hefe, Xenopus Oocyten, Säugerzellen) exprimieren. Zudem werden wir den Einfluss von aromatischen Resten auf den Ionentransport (Kationen--Interaktion) durch Mutationen untersuchen. Wir werden phänotypische Hefe-Assays (Ammonium, Kalium), Elektrophysiologie mit Oocyten (Protonen, Ammonium, Natrium, Chlorid), osmotische stopped-flow Assays (Wasser, Glycerol) sowie zelluläre Assays zum Protonenfluss mit pH-sensitivem green fluorescent protein (pHlourin) etablieren und die Leitfähigkeiten analysieren.

Wir Haben Durch Wenige（1-3）Aquaporinen Physiologisch的Punktmoutten相关的LeitfähigkeitenFürProtonen，Kaliumbzw。 Natriumionen Erzeugt。 ES IST也是始发的Gelungen，Den Aquaporin-Kationenfilter IM蛋白Zu Lokalisieren und ZuZerstören。 Beteiligt Ist Nicht Nur Die Zentrale Porenregion（Asparagin-Prolin-Alanin-sequeenzmotiv）Sondern auch die Engstelle Am Poreneingang Am Poreneingang Arginin-Region的精氨酸区域。水通道林地区的起源是美国水普通道蛋白 - 马丹顿的发展的主要因素。 Hefe-says（铵，kalium），Elektrophysiologie（质子，铵，铵，natrium，氯化），Osmotische停止流量测定（WASSER，甘油，甘油，甘油）Protonenflus Protonenflus ph-Sensitivem ph-Sensitivem绿色荧光蛋白（phliritige）dieblierenhhhemenhhhemenhhhemenhhhemenhhemenshhemenshemenshemeghyogiogie（protonen，铵，natrium，氯化）的wirlwind。