Biochemische und elektrophysiologische Charakterisierung des Aquaporin-Kationenfilters

水通道蛋白阳离子过滤器的生化和电生理学表征

• 批准号: 34732999
• 负责人: Professor Dr. Eric Beitz
• 金额: --
• 依托单位: Pharmazeutisches Institut
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2006-12-31 至 2010-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/34732999?language=en
• 关键词: Biochemische; und; elektrophysiologische; Charakterisierung; des

Wir haben durch wenige (1–3) Punktmutationen in Aquaporinen physiologisch relevante Leitfähigkeiten für Protonen, Ammonium, Kalium- bzw. Natriumionen erzeugt. Es ist also erstmals gelungen, den Aquaporin-Kationenfilter im Protein zu lokalisieren und zu zerstören. Beteiligt ist nicht nur die zentrale Porenregion (Asparagin-Prolin-Alanin-Sequenzmotiv) sondern auch die Engstelle am Poreneingang (aromatische Arginin-Region). Diese experimentellen Daten ermöglichen es nun, die existierenden theoretischen Modelle, die meist die zentrale Region allein für den Kationenausschluss verantwortlich machen, zu überprüfen. In der Fortsetzungsphase des Projekts werden wir die erhaltenen Aquaporin-Mutanten u.a. von Säuger-AQP1, Toxoplasma TgAQP und Plasmodium PfAQP in geeigneten Zellen (E. coli, Hefe, Xenopus Oocyten, Säugerzellen) exprimieren. Zudem werden wir den Einfluss von aromatischen Resten auf den Ionentransport (Kationen--Interaktion) durch Mutationen untersuchen. Wir werden phänotypische Hefe-Assays (Ammonium, Kalium), Elektrophysiologie mit Oocyten (Protonen, Ammonium, Natrium, Chlorid), osmotische stopped-flow Assays (Wasser, Glycerol) sowie zelluläre Assays zum Protonenfluss mit pH-sensitivem green fluorescent protein (pHlourin) etablieren und die Leitfähigkeiten analysieren.

我们在水中进行了(1-3)Punkttt突变，与之相关的是质子酸、铵、钾、钠。此外，还包括水通道蛋白-KationenFilter和蛋白质zu lokalisieren和zu zerstören。在波伦宁港(芳香族精氨酸区)发现了天门冬氨酸-脯氨酸-丙氨酸-序列基元(天门冬氨酸丙氨酸-丙氨酸-序列基序)。我们的实验是从现有的理论模型，到位于德国的中央区域，再到其他的地方。在Fortsetzungspase des Projekts中，我们发现了在Geeigneten Zellen(E.Coli，HEFE，Xenopus Ocyten，Säugerzellen)中的弓形虫TgAQP和疟原虫PfAQP，它们都是Ehaltenen Aquaporin-Mutanten U.S.A.von Säuger-AQP1。这是一种新的交通运输方式(Kationen--Interaktion)。我们用pHänotype ische Hefe-Assay(铵，钾)，电生理MIT卵细胞(质子，铵，钠，氯)，渗透性停流分析(Wasser，Glycerol)Sowie zelluläre Assay zum Protonenfluss MIT pH敏感绿色荧光蛋白(PHlourin)etablieren and die leitfähigkeiten analysieren。