Biochemische und elektrophysiologische Charakterisierung des Aquaporin-Kationenfilters

我们通过水通道生理学中的第（1 - 3）点突变获得了质子、铵、钾相关的Leitfähigkeiten。钠盐Es ist also estmals gelungen，den Aquaporin-Kationenfilter im Protein zu lokalisieren und zuzerstören.这并不是说中央孔区（天冬酰胺-脯氨酸-丙氨酸-序列）也是孔区（芳香精氨酸区）的一部分。这些实验表明，数据是真实的，理论模型，主要是中央地区对国际关系的影响。在该项目的研究中，韦尔登将研究水通道蛋白突变体。von Säuger-AQP 1、弓形虫TgAQP和疟原虫PfAQP在geeigneten Zellen（E. coli，Hefe，Xenopus Oocyten，Säugerzellen）explosieren.因此，韦尔登将通过突变来影响芳香化对离子转运（阳离子间相互作用）的影响。我们的韦尔登表型测定（铵、钾）、卵细胞电生理测定（质子、铵、钠、氯化物）、生物学停流测定（瓦塞尔、甘油）以及pH敏感性绿色荧光蛋白（pHlourin）测定和荧光分析。

Wir haben durch wenige (1–3) Punktmutationen in Aquaporinen physiologisch relevante Leitfähigkeiten für Protonen, Ammonium, Kalium- bzw. Natriumionen erzeugt. Es ist also erstmals gelungen, den Aquaporin-Kationenfilter im Protein zu lokalisieren und zu zerstören. Beteiligt ist nicht nur die zentrale Porenregion (Asparagin-Prolin-Alanin-Sequenzmotiv) sondern auch die Engstelle am Poreneingang (aromatische Arginin-Region). Diese experimentellen Daten ermöglichen es nun, die existierenden theoretischen Modelle, die meist die zentrale Region allein für den Kationenausschluss verantwortlich machen, zu überprüfen. In der Fortsetzungsphase des Projekts werden wir die erhaltenen Aquaporin-Mutanten u.a. von Säuger-AQP1, Toxoplasma TgAQP und Plasmodium PfAQP in geeigneten Zellen (E. coli, Hefe, Xenopus Oocyten, Säugerzellen) exprimieren. Zudem werden wir den Einfluss von aromatischen Resten auf den Ionentransport (Kationen--Interaktion) durch Mutationen untersuchen. Wir werden phänotypische Hefe-Assays (Ammonium, Kalium), Elektrophysiologie mit Oocyten (Protonen, Ammonium, Natrium, Chlorid), osmotische stopped-flow Assays (Wasser, Glycerol) sowie zelluläre Assays zum Protonenfluss mit pH-sensitivem green fluorescent protein (pHlourin) etablieren und die Leitfähigkeiten analysieren.