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前がん状態にあるヒト培養細胞へのがん遺伝子導入によるがん化

通过将癌症基因引入癌前人类培养细胞来实现癌变

基本信息

批准号：
61015028
负责人：
武藤明
金额：
$ 1.86万
依托单位：
福井医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト胎児肺由来の2倍体線維芽細胞TIG-1にSV40T抗原遺伝子を導入し、不老不死化したTM6-1-1株をすでに樹立している。この株細胞の形は平担で丸く、染色体数は47%がモード40,45%がモード79であり、蛍光抗体法によりT抗原の発現が認められた。血清要求性は2%に低下しているが、軟寒天培地中ではほとんど増殖せず、前癌状態にあると考えられる。大腸菌スフェロプラストとの融合や燐酸カルシウム共沈法により、効率よくこの株へ遺伝子を導入できることを確めた。ニトロソグアニジンに対する感受性は、げっ歯類の細胞よりかなり高い。種々の濃度のニトロソグアニジンで処理し培養を続けても、形態学的にトランスフォームした細胞は検出されなかった。またヒトの活性H-ras遺伝子を導入しただけでは、この無限増殖性の株は癌化の徴候を示さない。一方、マウス形質細胞由来のmyc遺伝子をSV40のプロモーター・エンハンサーにつないだpSVc-mycを導入すると、細まった多角形に変化するとともに配列も不規則となり、軟寒天培地中での増殖能が出現する。v-mycを入れた場合も同様の形態変化を生じたが、軟寒天中で増殖性は認められなかった。ヒトの活性H-ras遺伝子を導入したTM6-1-1株に活性c-mycをさらに入れると、やはり細胞の形態・配列の変化が起こるのみならず、ニワトリ胎児胚(しょう尿膜上)で増殖するに至る。活性c-mycによって生じた形態的特徴は、次に活性rasを導入しても変化しないが、mycだけの時には認められなかったニワトリ胎児胚での増殖能がrasが加わることによって出現する。従ってこの系は、ヒト細胞における癌化の多段階説の検証、各過程に関与する遺伝子の同定等に対して極めて有用であろう。なお、これらの活性癌遺伝子を保有するヒト細胞系列のヌードマウスにおける増殖性については、現在検討中である。

SV40T antigen gene was introduced into TIG-1, a diploid line derived from fetal lung, and TM6 -1-1 was established. The cells of this strain were found to be flat, with chromosome numbers of 47%, 40%, 79%, and T antigen detection by light antibody. The serum requirement is 2% lower, the soft cold weather is higher, and the pre-cancer state is higher. Escherichia coli strains are introduced by fusion and phosphate co-precipitation. The sensitivity of the cells to the virus is high. The concentration of the seed was determined by culture, morphology and cell culture. The introduction of active H-ras genes into the plant and the characteristics of carcinogenesis of the plant with unlimited reproduction were shown. The myc gene SV40 of the origin of the cell is introduced into the cell. The myc gene SV40 is introduced into the cell. The myc gene SV40 gene SV40 is introduced into the cell. The myc gene SV40 gene SV40 is introduced into the cell. v-myc, in the same situation, the same shape, the same color, the same color, the same color, The active H-ras gene was introduced into TM6 -1-1 strain, and the active c-myc gene was introduced into TM6 -1- 1 strain, and the morphology and alignment of cells were changed. The morphological characteristics of active c-myc are characterized by the presence of ras, which are introduced into the embryo. The multi-stage model of carcinogenesis, the relationship between each process and the identity of each gene, etc., are extremely useful. The active oncogene is retained in the cell line, and the reproduction process is ongoing.