ウッドチャック肝癌培養株ゲノム関連Enhancer・elementの解析

土拨鼠肝癌培养株基因组相关增强子/元件分析

• 批准号: 61570332
• 负责人: 小林 健一
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61570332/
• 关键词: ウッドチヤック肝細胞癌培異株; ウッドチヤック肝炎ウィルスゲノム; AC cluster; AT cluster; Enhancer活性; CATシステム; プラスミッド

教室で樹立しえたウッドチャック肝細胞癌培養株(WH257GE10:腫瘍倍加時間40時間)の150代目を用い、組み込まれた特異なclusterすなわちAC repeat sequenceおよびAT repeat sequenceと再編成なしに組み込まれていたウッドチャック肝炎ウィルスの約4分の1に相当するゲノムをサザン・トランスファー・モレキュラー・クローニングによって抽出し、プラーク培養により大量化した。このクローニングしえたDNAをスーパー・コイル状のプラスミッドDNAでトランスフェクトレ、クロランフェニコール・アセチールトランスフェラーゼ(CAT)システム内に挿入し、当該DNAがEnhancer・elementととしての性格を有するか否かを検定した。作製した当該DDAは前述の3つの領域すべてを含むプラスミッド109-2、AC clusterとWHVDNAの2つを含む107、AT clusterとWHVDNAを含む108-2、各々1つずつからなるプラスミッド123-8,124,125-4の計6つであった。すべてのプラスミッドがEnhancer活性を示したが、活性の強さはそれぞれ異なっており、もっとも強い活性を示したプラスミッドは107であり、以下124,123-8,125-4,108-2,109-2の順位であった。すなわち3つの領域すべてを含むプラスミッド109-2がもっとも弱い活性を示したが、このことは、ときにある部分がEnhancer活性に対して抑制的に働く場合もありうることを示したものであると思われる。さらにこれら活性を示したDNAプラスミッドが本来の培養株WH257GE10と子宮頸癌由来培養株HeLaのどちらにおいて、より強い活性を示すか否かをみた結果、むしろ後者の細胞においてより強いEnhancer活性を示した。Enhancer活性はときに種特異性を超えて作用するといわれてはいるが、さらに今後検討を要する課題である。

In the classroom, で was established. The <s:1> えたウッドチャッ was used to set up a culture strain of hepatocellular carcinoma (WH257GE10: tumor doubling time 40 time). The <s:1> 150th generation を was used with すなわち, group み込まれた specific なclusterすなわちAC repeat sequenceおよびAT repeat Sequence と again plait な し に group み 込 ま れ て い た ウ ッ ド チ ャ ッ ク hepatitis ウ ィ ル ス の の about 4 points 1 に quite す る ゲ ノ ム を サ ザ ン · ト ラ ン ス フ ァ ー · モ レ キ ュ ラ ー · ク ロ ー ニ ン グ に よ っ て spare し, プ ラ ー ク cultivate に よ り large quantitative し た. こ の ク ロ ー ニ ン グ し え た DNA を ス ー パ ー · コ イ ル shape の プ ラ ス ミ ッ ド DNA で ト ラ ン ス フ ェ ク ト レ, ク ロ ラ ン フ ェ ニ コ ー ル · ア セ チ ー ル ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ (CAT) シ ス テ ム within に scions into し, when the DNA が Enhancer, element と と し て の personality を have す る か no Youdaoplaceholder1 を検 set た. Cropping し た when the DDA は aforesaid の 3 つ の field す べ て を containing む プ ラ ス ミ ッ ド 109-2, AC cluster と WHVDNA の 2 つ を む 107, ats Cluster と WHVDNA を containing む 108-2, 1 each 々 つ ず つ か ら な る プ ラ ス ミ ッ ド 123-8124125-4 の 6 つ で あ っ た. す べ て の プ ラ ス ミ ッ ド が を Enhancer activity in し た が strong, active の さ は そ れ ぞ れ different な っ て お り, も っ と も を and shown strong い activity し た プ ラ ス ミ ッ ド は 107 で あ り, below 124123-8125-4108-2109-2 の sequence で あ っ た. す な わ ち 3 つ の field す べ て を containing む プ ラ ス ミ ッ ド 109-2 が も っ と も weakly い を shown し た が, こ の こ と は, と き に あ る part が Enhancer active に し seaborne て inhibition of に 働 く occasions も あ り う る こ と を shown し た も の で あ る と think わ れ る. を さ ら に こ れ ら activity in し た DNA プ ラ ス ミ ッ ド が originally の cultivation strains WH257GE10 origin cultivation strains と cervical cancer HeLa の ど ち ら に お い て, よ り を and shown strong い activity す か no か を み た results, む し ろ latter の cells に お い て よ り strong い Enhancer active を shown し た. Enhancer active は と き に species-specific を super え て role す る と い わ れ て は い る が, さ ら に 検 for future を to す る subject で あ る.

项目成果

Shuichi Kaneko: Journal of Virology.

金子秀一：病毒学杂志。