発作性夜間血色素尿症患者血球の補体脆弱性に関する研究

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者血细胞补体脆弱性研究

• 批准号: 61570570
• 负责人: 阿部 帥
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61570570/
• 关键词: 発作性夜間血色素尿症; decay accelerating factor(DAF); 補体; 溶血

ヒト赤血球膜からDAFを精製し、これを用いてモノクロナル抗DAF抗体を作成した。ELISAによるDAFの定量法を開発した。その概要は:1)96穴のマイクロプレートに抗DAF抗体を10μg/ml,100μl/well入れてコーテイング。2)1%BSA,PBSにてブロック。3)10mΜEDTA,0.5%Tween,PBSにて洗淨後、X6,X10,X15に稀釈したサンプルを加えて37℃,2時間反応。4)ビオチン化抗DAF抗体500ng/mlを100μl加え、37℃,1時間反応後、洗淨。5)アビジン・ビオチン複合体を0.05%Tween,PBSにて調整し、100μlを加えてさらに1時間37℃反応後洗淨。6)基質ABTSを加え、37℃60分発色させ波長414nmで測定した。標準曲線の作成は既知濃度の精製DAF(180μg/ml)を希釈して用いた。標準曲線は直線関係を示した。各血球抽出物は、1%NP-40,PBS(蛋白分解酵素阻害剤を含む)に溶解後、15,000γpmの遠心にて不純物を除きDAF測定に供した。DAFの分子量を70000として各血球のDAF量を算定,molecules/cellで表わした。各血球DAF量の正常値は、赤血球3110±960molecules/cell(n=30),好中球28000±13900(n=15),血小板3100±1370(n=15)であった。これに対し、PNHの赤血球は1406±784(n=16)と有意の低値を示した(P<0.001)の好中球は14800±19800(n=4)で4例中1例は正常値を示し、血小板は1240±550(n=4)で全例低値を示した。PNH4例について、赤血球DAF量と赤血球寿命,LDH,間接ビリルピン値を対比すると、DAF量の低下と各種検査の異常との間に相関が認められた。また赤血球DAF量はPNH-【III】赤血球比率との間に相関が認められた。またHam試験で70%の溶血率を示した症例の赤血球をあらかじめ精製DAFと孵置しておくとHam試験の溶血率は10%に減弱が認められた。以上要約するとPNH患者血球にはDAF欠損血球が存在し、とくに赤血球では補体脆弱性と密接な関連性を示した。

The red blood cell membrane was purified and the anti-DAF antibody was prepared. Development of a quantitative assay for DAF by ELISA A summary of the company is as follows:1) The anti-DAF antibody at the 96-hole MAIKROPLER was prepared at 10μg/ml,100μl/well. 2)1%BSA,PBSにてブロック。3)10 mM EDTA, 0.5%Tween,PBS after washing, X6,X10,X15 after dilution, add 37℃, 2 time reverse. 4) Anti-DAF antibody 500ng/ml or 100μl, 37℃, 1 time reaction, washing. 5) 6)The ABTS of the matrix was determined at 37℃ at 60 ℃ and at 414nm. The standard curve was prepared by refining DAF(180μg/ml) at a known concentration. Standard curves show the relationship between straight lines. Each blood cell extract was dissolved in 1% NP-40,PBS(protease inhibitor), and the impurities were removed at 15,000γpm. The molecular weight of DAF is 70000. The amount of DAF in each blood cell is calculated. The molecules/cells are expressed. The DAF of each blood cell was 3110±960molecules/cell(n=30), 28000±13900(n=15), and 3100±1370(n=15). In contrast, PNH red blood cells were 1406±784(n=16) and intentionally low values (P<0.001), and good middle blood cells were 14800±19800(n=4), normal values were 1 case in 4 cases, platelets were 1240±550(n=4) and all cases were low values. 4 cases of PNH, red blood cell DAF amount and red blood cell life,LDH, indirect red blood cell value, low DAF amount, various abnormal and intermittent correlation Red blood cell DAF quantity PNH-[III] red blood cell ratio and time correlation The hemolysis rate of Ham test was 70% and the hemolysis rate of Ham test was 10% The above results show that the presence of DAF deficient cells in PNH patients is associated with complement vulnerability.

项目成果

阿部師,二宮治彦,中沢正樹,長沢俊郎,藤田禎三: 臨床血液. (補). 437 (1986)

Abe S.、Ninomiya Haruhiko、Nakazawa Masaki、Nagasawa Toshiro、Fujita Teizo：临床血液学（补充）437（1986）。

二宮治彦,阿部師,藤田禎三: 臨床血液. (補). 438 (1986)

Haruhiko Ninomiya，S. Abe，Teizo Fujita：临床血液学（补充）438（1986）。

二宮治彦,今川重彦,花田尚,阿部師,藤田禎三: 臨床血液.

Haruhiko Ninomiya、Shigehiko Imakawa、Hisashi Hanada、S. Abe、Teizo Fujita：临床血液学。

Ninomiya,H.;Abe,T.;Fujita,T.: Blood.

二宫，H.；阿部，T.；藤田，T.：血。

二宮治彦,阿部師,藤田禎三: 第23回補体シンポジウム講演抄録集. 23. 119-122 (1986)

Haruhiko Ninomiya、Shi Abe、Teizo Fujita：第 23 届补充研讨会讲座摘要。23. 119-122 (1986)