NK細胞の分化・成熟に及ぼす血管内皮細胞の影響

血管内皮细胞对NK细胞分化成熟的影响

• 批准号: 03671173
• 负责人: 阿部 帥
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03671173/
• 关键词: NK細胞; 分化・成熟; 血管内皮細胞

〔方法〕健常人とヒト骨髄細胞をYodaの方法(1988)に準じてselected bone marrow cellを分離し,IL2を添加して21日間培養し,NK細胞を誘導した。この培養系に各種ヒト臍帯内皮細胞培養濾液を各種濃度に添加し,NK細胞の生成に及ぼす影響を検討した。NK細胞の判定はlarge granular lymphocyte(LGL)およびCD56陽性細胞で判定した。臍帯内皮細胞培養濾液は,(1)Confluent:MCDB151+15%FBS+10ng/μl rhaーFGF+5μg/ml heparinを培地として,フラスコ25cm^2あたり約10^6コのヒト臍帯内皮が付着した状態で培養。confluentになった状態で培地を交換して2日間培養。その後培地を回収して0.2μmのフィルタ-を通したもの,(2)subconfluent:顕微鏡で見てまだ隙間のある状態で2日間培養した培地,を用いた。〔結果・考察〕CD56陽性細胞数およびLGL数は培地のみを加えた場合は対照に比し差異を認めなかった。confluentを加えた場合は対照および培地のみを加えた場合に比し1,2,3週目において有意の変化が認められなかった。これに対しsubconflurentを加えた場合は対照,培地のみおよびconfluentを加えた場合に比しCD56陽性細胞数およびLGL数は有意の高値を示した。subconfluentの添加量は少量(5μl)から量を多くするにしたがってその添加効果は低下した。subconfluentの少量(5μl)を加えて培養した場合の全細胞中のCD56陽性細胞数の割合は90%と他の添加培養系に比い高値を示した。以上の成績はNK細胞が骨髄で成熟する際の内皮細胞との接触が重要な役割を果たしている可能性を示唆しているように考えられる。現在,内皮細胞養濾液中の有効成分の解明を継続している。

[Methods] Yoda's Method for Healthy Human Bone Marrow Cells (1988): Isolation of Selected Bone Marrow Cells, Addition of IL2 to 21 Day Cultures, Induction of NK Cells To investigate the effects of different concentrations of umbilical endothelial cell culture filtrate on NK cell production in different culture systems NK cells are judged as large granular lymphocytes (LGL) and CD56 positive cells. Umbilical endothelial cell culture filtrate: (1)Confluent:MCDB151+15%FBS+10ng/μl rha-FGF +5μg/ml heparin. Confluent condition is cultivated by exchanging 2 days. After the cultivation of the ground, the ground is returned to the ground, 0.2μm,(2)subconfluent: the micro-mirror is seen in the gap between the ground and the ground. [Results] The number of CD56-positive cells was higher than that of LGL cells. Confluent is added to the case, and the case is added to the case, and the case is added to the case. In contrast, when subconflicting is added, the number of CD56-positive cells and the number of LGL are significantly higher when cultivating soil and confluent are added. The amount of subconfluent added is small (5μl), but the amount is large. The number of CD56-positive cells in whole cells was 90% when a small amount of subconfluent (5μl) was added to the culture medium and higher than that in other added culture systems. These results indicate the importance of endothelial cell contact during NK cell maturation and the possibility of cell differentiation. Now, endothelial cell culture fluid has a component of the solution to solve the problem.