細胞増殖休止期から増殖期への移行過程に関与する微小管結合蛋白質類縁蛋白質の精製

细胞生长静止期向增殖期转变过程中涉及的微管相关蛋白的纯化

• 批准号: 61580152
• 负责人: 小林 孝彰
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61580152/
• 关键词: 細胞増殖; 細胞骨格; 微小管; プロテインキナーゼ

ラット脳より、微小管結合蛋白質1,2,およびX(以下、MAP1,MAP2,MAPXと呼ぶ)を精製し、それぞれに対する抗体を作製した。このMAP1抗体を用いて、ラット各組織のMAP1およびMAP1類縁タンパク質を定量したところ、MAP1タンパク質群は、調べた限り、全ての組織において検出されたが、特に神経組織には高濃度に存在し、その量は非神経組織に比べて数十倍〜数百倍であった。これだけ濃度の違いが激しいと機能はおろか、別のタンパク質ではないかと考えられたので、詳しく検討した結果、別タンパク質であった。即ち、神経組織のMAP1はSDSゲル電気泳動によりダブレットとなるが、非神経組織の"MAP1"はシングレットであった。さらに、二次元ペプチドマッピングによって別タンパク質であることを明らかにすることができた。非神経組織のMAP1の精製はMAP1抗体を固定したアフィニティカラムにより行なった。チューブリンの重合促進活性を有しており、未変性である。プロティンキナーゼの良い基質となるが、リン酸化と生理活性の関係は今後の検討課題である。培養非神経細胞内におけるMAP1の分布は蛍光抗体法により組織化学的に行なった。分布は主に細胞質であったが、核内にも小量検出された。培養繊維芽細胞においては増殖刺激(血清,増殖因子)により、MAP1のリン酸化が観察された。また、新たな合成も観察された。MAP1が微小管に結合し得ることは既に述べたが、核内のMAP1が微小管に結合しているか否かについては、今後の検討を待たねばならない。

ラット脳より, microtubule-binding protein 1,2, およびX (hereinafter, MAP1, MAP2, MAPXとHUぶ) を purified し, それぞれに対するantibody を した.このMAP1 antibody を Use いて, ラットEach tissue のMAP1 およびMAP1 type 縁タンパクQuantitative したところ, MAP1 タンパクQuality group は, adjust べたlimited り, full ての tissue におい検 検出 されたが, special に神経的 Organization には high concentration にexisting し, そのquantity は non-神経organization に tens to hundreds of times more than べて であった.これだけconcentrationのviolationいがstimulationしいとfunctionはおろか、不のタンパク性ではないかと考えられたので, detailed しく検question した results, and タンパクquality であった. That is, the "MAP1" of the non-Kamitsu Organization and the "MAP1" of the non-Kamitsu Organization.さらに、two-dimensional ペプチドマッピングによって比タンパク性であることを明らかにすることができた. Non-organized MAP1 purified MAP1 antibody is fixed and fixed.チューブリンの overlap and promote active をhave しており, unmodified である. The relationship between プロティンキナーゼの好いとなるが, リン acidification and physiological activity is a future research topic. The distribution of MAP1 in cultured non-neural cells was analyzed using the photoantibody method and histochemistry. The distribution is mainly in the cytoplasm and a small amount in the nucleus. Cultivate the cells and stimulate their proliferation (serum, proliferative factors) and MAP1 acidified cells.また, new たなsynthetic も観看された. The combination of MAP1 microtubules and the combination of MAP1 and MAP1 microtubules. The combination of the small tube is not the same, and the future is the same as the future.

项目成果

Kazushi Tanabe: J.Biochem.100. 59-65 (1986)

田边和志：J.Biochem.100。

松本元: 生物物理. 26. 1-12 (1986)

松本肇：生物物理学。26. 1-12 (1986)

Shoichiro Tsukita: J.Cell Biol.102. 1710-1725 (1986)

Shoichiro Tsukita：J.Cell Biol.102。

Takaaki Kobayashi: J.Cell Biol.102. 1699-1709 (1986)

小林贵明：J.Cell Biol.102。