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急性・慢性日本住血吸虫症のモノクローナル抗体を用いた循環抗原の検出と治療効果判定

急慢性日本血吸虫病单克隆抗体检测及疗效评价

基本信息

批准号：
62570172
负责人：
松田肇
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至 1988
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62570172/
关键词：
日本住血吸虫症モノクローナル抗体循環抗原

项目摘要

1.(1)日本住血吸虫症の排泄・分泌(ES)抗原をSDS-PAGEで展開後、Immunoblotting法により感染ウサギ血清で検討した。感染初期(3週)に出現する抗体は、分子量31/32kdの蛋白と強く反応し、このバンドは感染40週以降まで存続した。他の宿主(ヒト、マウス)においても同一抗原を認識する抗体の存在が認められ、31/32kd抗原はES抗原の主要バンドと推測され、(2)31/32kd抗原を認識する抗体は、プラジカンテルでの完全治療により、2ヶ月後に急激に消退することから治癒判定にも本抗原が有用であることが示唆された。2.ES抗原に対するモノクローナル抗体(MAB)の作製と性状を検討した。ES抗原に対して高いELISA値を示す融合細胞上清をクローニングし、5種のMABを樹立した。これらは全て免疫蛍光法で成虫の消化管と強く反応し、Immunoblotting法により4種のMABが31/32kdの抗原と強く反応した。3.MABを用いた二抗体Sandwich法による抗原検出を検討した。ES抗原を用いたスクリーニングの結果、最も鋭敏で成虫のTCA可溶性抗原(AWA-TCA)と反応し、虫卵抗原とは反応しない1-7B(IgM)MAbを選別した。4.ES抗原を抗ES抗体に添加したところ、強固な免疫複合体(CIC)を形成し、抗原検出は不可能となった。各種の血清処理を行った結果、3%PEG法でCICを沈澱させ、加熱(90℃、10分)により抗体を失活させた上で検出可能となり、検出感度は1μg/ml(ES)、及び0.3μg/ml(AWA-TCA)であった。5.感染ウサギ血清中の循環抗原(CA)は、感染濃度に比例して出現し、500隻以上のセルカリア感染でCAが検出され、6週以降高い血中レベルが続いた。虫卵陽性者のCA検出率は7/50例(14.0%;1%危険率)で、慢性症(抗体陽性者)では全て陰性であった。以上のように、ES抗原の主要バンドと反応し、成虫の消化管由来の抗原を認識するMAbによる血中循環抗原の検出が可能となった。更に高感度測定法の検討が望まれる。

1. (1)Schistosoma japonicum excretion and secretion (ES) antigen after SDS-PAGE development, Immunoblotting method for infection of serum Antibodies and proteins with molecular weight of 31/32kd were found in the early stage of infection (3 weeks), but they declined after 40 weeks of infection. The presence of antibodies to the same antigen recognized by other hosts is recognized, the main reason for ES antigen recognition by 31/32kd antigen is presumed,(2) antibodies to 31/32 kd antigen recognized, complete treatment by 31/32kd antigen, acute resolution by 2 months, and determination of cure by 31/32kd antigen are useful. 2. Study on the production and characterization of ES antigen and MAB. ES antigen was detected in the supernatant of fusion cells, and 5 MABs were established. In this study, four MAB antigens of 31/32kd were detected by immunoblotting method and four MAB antigens of 31/32kd by Immunoblotting method. 3. MAB was detected by Sandwich method. The results of ES antigen selection, the most sensitive adult TCA soluble antigen (AWA-TCA), and egg antigen (EAG) were compared. 4. Anti-ES antibody is added to the ES antigen to strengthen the immune complex (CIC) formation. Antigen detection is impossible. The results of various serum treatments, CIC precipitation by 3% PEG method, inactivation by heating (90℃, 10 min), detection sensitivity of 1μg/ml(ES), and 0.3μg/ml(AWA-TCA) were obtained. 5. The circulating antigen (CA) in the serum of infected mice was detected in proportion to the infection concentration. More than 500 CA were detected in the serum of infected mice, and the concentration of CA in the serum decreased by 6 weeks. The positive rate of CA was 7/50 (14.0%;1% critical rate). The chronic disease (antibody positive) was negative. The above results show that the detection of circulating antigens in the blood is possible due to the recognition of ES antigens in the digestive tract of adults. The high sensitivity assay method is expected to be developed.