骨中γ-Carboxyglutamic Acid含有蛋白に関する研究-蛋白の精製, 抗体の作製, および免疫組織化学的研究

含γ-羧基谷氨酸的蛋白质在骨中的研究——蛋白质纯化、抗体生产和免疫组织化学研究

• 批准号: 62570810
• 负责人: 賀来 亨
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Health Sciences University of Hokkaido
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62570810/
• 关键词: Bone γ-carboxyglutamic acid; BGP; ABC法; 酵素抗体法

骨組織は69%の無機質, 22%の有機質ならびに9%の水より構成される. 有機質の90%はtype I コラーゲンで残りが非コラーゲン蛋白である. BGPは非コラーゲン蛋白の主要な成分であり, その20%を占める.1.BGPの精密 1)粉砕骨の作製:ポリトロンRT10/35で試みたが, 粉砕に長時間を要したので, フリーザー/ミル No.6700を用い, 比較的短期間に微細粉砕骨を作製できた. 2)Price etalの方法に準じて精製を試みたが, 蛋白収量が悪く, Gundberg etalの方法に準じて行った. ア.脱灰は0.5%EDTA,pH8.0, 4°C, Protein inhibitorを添加し行った. 脱灰後, 透析を行う(透析膜Cut off10000). イ.Sephade×G75gelにかけ分子量約10000に相当する部分を集めた. ウ.限界濾過器の濃縮を行わず, 必要に応じ, 凍結乾燥を行った. エ.DE53(Whatman)を用い, イオン交換カラムクロマトグラフィーを2回行った. オ.精密BGPとした. 精密BGPは脱イオン水で透析脱塩を行い, 凍結乾燥した. 3)免疫は家兎に免疫した. 4)骨組織標本作製:ホルスリン固定後, EDTA脱灰とした.2.免疫組織化学的染色はAvidin-Biotin Complex(ABC)法により行った.3.BGPの局在: 骨芽細胞, 骨細胞, これらの細胞に近接する類骨基質辺縁に認めた. 若干, 骨髄細胞にBGPの染色が認められた. 軟骨細胞には局在は認められなかった.第30回歯科基礎医学会で上記演題名で報告する予定である.

Bone tissue is composed of される of 69% <s:1> inorganic matter, 22% <s:1> organic matter ならびに and 9% <s:1> water よ. 90% organic matter の は type I コ ラ ー ゲ ン で residual り が non コ ラ ー ゲ ン protein で あ る. BGP は non コ ラ ー ゲ ン protein の main な components で あ り, そ accounted for 20% の を め る. 1. The BGP の precision: the 1) powder 砕 bone の cropping ポ リ ト ロ ン RT10/35 で try み た が, Powder 砕 に long を to し た の で, フ リ ー ザ ー / ミ ル No. 6700 を い, relative short period に micro powder 砕 bone を cropping で き た. 2) the Price etal の way に quasi じ て refined を try み た が, amount of protein 収 が 悪 く, Gundberg etal の way に quasi じ て line っ た. ア. Desashing を 0.5%EDTA,pH8.0, 4°C, Protein inhibitorを add arched line った. Line after deashing, dialysis を う (dialysis membrane Cut off10000). イ. Sephade x G75gel に か け molecular weight about 10000 に す る part を set め た. ウ. Line limit filtration apparatus の enrichment を わ ず, necessary に 応 じ, freeze drying line を っ た. エ. DE53 (Whatman) を い, イ オ ン exchange カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー を 2 return っ た. オ. Precision BGP と し た. Precision BGP は イ off オ ン で dialysis to take off the salt water を い, freeze drying し た. 3) immune は home 兎 に immune し た. 4) : the osseous tissue specimens cropping ホ ル ス リ ン fixed, EDTA deashing と し た. 2. Immunohistochemical staining によ Avidin-Biotin Complex(ABC) method によ perform った.3.BGP locations: osteoblasts, osteocytes, <s:1> れら <s:1> cells に adjacent する bone matrix 辺 に identify めた. A number of bone marrow cells にBGP <s:1> staining が recognize められた. Chondrocytes に <s:1> local った recognize められな った った った. The title of the presentation at the 30th 歯 basic medical Society で is で report する approved for である.