MC3T3-E1細胞のプロティイン・ホスファターゼ。モノクロナール抗体と^<31>P NMRでの研究

MC3T3-E1 细胞中的蛋白磷酸酶。

• 批准号: 62570832
• 负责人: 高橋 浩二郎
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 1988
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62570832/
• 关键词: アルカリホスファターゼ; アシドホスファターゼ; MC3T3-E1; 骨芽細胞; プロテェイン; ホスファターゼ; 上皮成長因子; ホスアミノ酸; 31-NMR

1.当該年度予定のMC3T3-E1細胞のアルカリホスファターゼ及びアシドホスファターゼのモノクロナール抗体作製に先だって、同細胞の増殖に伴うチロシン残基に特異的なキナーゼ・DNA量・カルシウムの沈着量の経時変化に対応させて、それらホスファターゼの発現状態を詳細に調べた。その結果は、次の様であった(論文作成中:1989Alkaline Phosphatase Symposium(Fed.1-3,La Jolla),Biology of Cellular Transducing Signals '89(May 8-12,Washington D.C.)にて発表)。(1)ホスホチロシンに特異的なアシドホスファターゼの発現は、細胞培養開始後8日目でピークになり、その4日後にはそのピークの約2/3にまで減少し、そのレベルは42日後になっても維持されていた。この傾向は、細胞の全キナーゼ活性の発現状態に対応していた。(但し、チロシン・キナーゼ部分の活性は培養開始直後が最大で、急激な減少が相次ぎ、8日目にはその活性はほとんど検出できない程度に成っていた。)。(2)一方、アルカリホスファターゼは細胞培養開始後4日目までは全く発現していなかったが、4日目以後次第に上昇し、12日目に一度ピークに達した後に減少を続け、36日目を過ぎたあたりから再び発現状態は上昇し始めた。このアルカリホスファターゼの後期での発現に対応して、細胞外へのその分泌が起こっていた。(3)アルカリホスファターゼの最初のピーク後、約一週間でDNA量の増加(細胞分裂)は停止し、同時にカルシウム沈着量の急激な増加がアルカリホルファターゼの細胞外分泌に対応した形で観測された。2.上記に示したホスファターゼの最大発現の培養日数(アシドホスファターゼ:培養開始後8日目、アルカリホスファターゼ:培養開始後12日目及び36日目以後)をめどに、それらのホスファターゼの大量精製もほぼ終わり、引続き抗体作成を準備中である。(秋には終了予定)。

1. When the annual designated の MC3T3 E1 cells の ア ル カ リ ホ ス フ ァ タ ー ゼ and び ア シ ド ホ ス フ ァ タ ー ゼ の モ ノ ク ロ ナ ー ル に だ first the antibody cropping っ て, associated with cell に の raised colonization う チ ロ シ ン residues に specific な キ ナ ー ゼ, amount of DNA, カ ル シ ウ ム の shen the quantity の 経 variations change when に 応 seaborne さ せ て, そ れ ら ホ ス フ ァ タ Youdaoplaceholder0 ゼ occurrence status を detailed に call べた. Youdaoplaceholder0 そ results そ, sub-samples であった(in the process of writing :1989Alkaline Phosphatase Symposium(Fed.1-3,La Jolla),Biology of Cellular Transducing Signals '89(May) (8-12,Washington D.C.)にて. (1) ホ ス ホ チ ロ シ ン に specific な ア シ ド ホ ス フ ァ タ ー ゼ の 発 は, cell culture after the start of 8 orders で ピ ー ク に な り, そ の 4 later に は そ の ピ ー ク の around two-thirds に ま で reducing し, そ の レ ベ ル は 42 later に な っ て も maintain さ れ て い た. The <s:1> <s:1> tends to, and the cell <s:1> is fully キナ ゼ ゼ. The state of the active <e:1> is に against the 応 <s:1> て た た た. (but し, チ ロ シ ン · キ ナ ー ゼ part の active は training start straight after が biggest で, nasty shock な reducing ぎ が phase time, 8 eyes に は そ の active は ほ と ん ど 検 out で き な い に into っ て い た.) . (2) one party, ア ル カ リ ホ ス フ ァ タ ー ゼ は cell culture after the start of 4 orders ま で は full く 発 now し て い な か っ た が, 4 yard after rising and sizable に し, 12 に once ピ ー ク に da し た に after reducing を 続 け, 36, mesh を ぎ た あ た り か ら again び 発 beginning now rising state は し め た. こ の ア ル カ リ ホ ス フ ァ タ ー ゼ の late で の 発 now に 応 seaborne し て, extracellular へ の そ の secretion が up こ っ て い た. (3) ア ル カ リ ホ ス フ ァ タ ー ゼ の initially の ピ ー ク で DNA quantity between, about a week after の rights (cell division) は stop し, at the same time に カ ル シ ウ ム の nasty shock な shen the quantity raised and が ア ル カ リ ホ ル フ ァ タ ー ゼ の exocrine cells に 応 seaborne し た form で 観 measuring さ れ た. 2. Written に shown し た ホ ス フ ァ タ ー ゼ の 発 now biggest の training days (ア シ ド ホ ス フ ァ タ ー ゼ : training after the start of 8 orders, ア ル カ リ ホ ス フ ァ タ ー ゼ : culture yard and び 36 days after the start of 12) after を め ど に, そ れ ら の ホ ス フ ァ タ ー ゼ の lots of refined も ほ ぼ eventually わ り and 続 き antibodies made を prepared で あ る. (autumn に に is finalized).

项目成果

Kojiro Takahashi: Biochem. Biophys. Res. Comm.

高桥小二郎：生物化学。

Kojiro Takahashi.: FEBS Letter.

高桥小二郎：FEBS 信函。

Kojiro Takahashi.: Eur.J.Biochem.

高桥小次郎：Eur.J.Biochem。

Yasuhiro Nakayama.: Eur.J.Biochem.

Yasuhiro Nakayama.：Eur.J.Biochem。