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タンパク質リン酸化チロシン膜リン酸化酵素の同定を当該遺伝子のクローニング

蛋白磷酸酪氨酸膜激酶的鉴定及基因克隆

基本信息

批准号：
01015007
负责人：
立木蔚
金额：
$ 6.02万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

われわれはラット肝から精製した蛋白ホスファターゼIA(2C)の化学分析を基に、オリゴヌクレオチドプローブを合成し、まずラット肝cDNAライブラリーを、次いでラット腎cDNAライブラリーをスクリーニングし、pSTー11なるクローンを得た。このものは1602kbpの読取り枠をもち、分子量42,416の蛋白をコードしていた。推定されるアミノ酸配列中にIAからの3個のオリゴペプチドのほかに、他から報告されたIAの2個のオリゴペプチドも検出され、上の読取り枠はホスファターゼIAの全長をコードしていることが確実に思われた。しかし、こうして得られたIAのアミノ酸配列には他の蛋白ホスファターゼとの間に相同性がまったく認められなかったので、上のpSTー11のcDNAを大腸菌に発現させ、活性を有するホスファターゼIAの生産を試みた。まずそのためのプラスミドを構築したが、これに10tacプロモータが用いられた。次いでこのプラスミドで大腸菌を形質変換させ、その大腸菌の抽出液を作って電気流動したところ、ホスファターゼIAの抗体を免疫反応し、かつホスファターゼIAと同サイズの蛋白バンドが認められた。さらにこのバンドが認められた抽出液には、ホスファターゼIAに特徴的なMg^<2+>依存性の蛋白ホスファターゼ活性が検出され、しかもバンドも活性もtacプロモーターを逆向きに挿入したプラスミドによっては生じなかった。以上から、pstー11がホスファターゼIAをコードしていることがまったく確実となった。次に以上のcDNAをプローブといて、ノーザンブロット法によりラット諸組織のmRNA量を測定したところ、骨格筋や精巣で肝や腎よりもはるかに高かった。活性測定では肝が骨格筋の2倍以上であるので、不一致は明らかに大きい。現在この理由を追求中である。

IA (2C), chemical analysis, chemical analysis, synthesis, liver, cDNA, liver, liver, cDNA, liver, liver, liver The molecular weight, 1602kbp, molecular weight, molecular weight and molecular weight were obtained. It is presumed that there are three real-time data in IA, one in two, two in IA, one in two, and the other in two, and the whole number of customers in IA is calculated to be full-length and accurate. The results showed that there was no significant difference between the two groups in terms of IA protein, protein I don't know what to do. I don't know. I don't know what to do. The liquid extracted from the bacteria was used as an anti-virus in the flow of electricity, the anti-IA antibody was immunized, and the IA was detected in the same way as the protein. The exudate, the IA dependent protein, the active protein, the active tac, the reverse extract, the extract, the lt;2+> dependence, the protein, the activity, the extract, the lt;2+> dependence, the protein, the activity, the activity, the reverse effect, the extract, the lt;2+>, the protein, the protein, the activity, the activity, the extract, the lt;2+>, the protein, the activity, the activity. The above, pst