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レタス種子発芽における光誘導GA_1の受容体の単離同定

光诱导生菜种子萌发GA_1受体的分离与鉴定

基本信息

批准号：
63540526
负责人：
井上康則
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63540526/
关键词：
レタス種子発芽ジベレリン受容体フィトクロム赤色光

项目摘要

1.受容体生合成時期を確認する目的で、まずタンパク質合成阻害剤の発芽に対する効果を調べた。その結果、転写段階の阻害剤(アクチノマイシンD、αアマニチン)は、発芽をほとんど阻害せず、翻訳段階の阻害剤(シクロヘキシイミド)が効果的に発芽を阻害した。そこで、同阻害剤を異なる濃度で、異なる時間パルス的に与え、発芽のタイムコースのずれを調べたが、阻害剤処理時間以上に発芽が遅れ、傾きも緩やかになった。このことは洗浄によっても阻害剤の影響が完全には除去できないことを意味しており、阻害剤処理による発芽の遅れから、受容体合成時期を決定することは無理のあることが明らかになった。2.アフィニティークロマトグラフィーを行なうために、ジベレリン(GA)をゲルに固定することを試みた。GAは高い生理作用を示しかつ入手が容易なGA_3を選び、7位の-COOHを介してEAH-セファロースチBと、3位あるいは13位の-OHを介してエポキシ活性化セファロース6Bと結合させた。その結果、それぞれゲル1ml当り0.3μM、0.1μMのGA_3が固定された。3.GAに対する感受性測定結果から、受容体が確実に存在していると考えられる。25℃暗所で4時間培養したレタス種子20gにPVPを加え、緑色安全光下で乳鉢と乳棒ですりつぶし、セファロースG25で低分子を除いた後、2で作成した2種類のゲルに吸着させた。これを、10^<-3>MGA_3で溶出し、得られたタンパク質画分をSDSページにかけてみた。その結果数本のバンドが認められたが、2種類のゲルでバンドパターンに差がなかった。この結果は、得られたバンドが非特異的な吸着によるものであることを示唆している。さらに、どちらかのゲルに特異的なバンドを得るべく、溶出条件等を検討したが、残念ながら現在に至るまで明確な差は得られていない。

1. The purpose of determining the time of receptor synthesis is to adjust the effect of receptor synthesis inhibitor development. As a result, the resistance agent (s) of the writing stage (s)(a) and (b)(c)(D)(e)(e)(d)(e)(d)(e)(e)( For example, the concentration of the same inhibitor is different, the time is different, and the time is different. The influence of the inhibitor is completely eliminated, and the inhibitor treatment period is determined. 2. GA has high physiological function, easy to start, easy to select GA_3, easy to select-COOH at position 7, easy to activate GA_3, easy to bind-COOH at position 13, easy to activate GA_3, easy to bind-COOH at position 7, easy to activate GA_3, easy to bind-COOH at position 13, easy to activate GA_3, easy to activate GA_3, easy to bind-COOH at position 7, easy to activate GA_3. The results showed that GA_3 was stable at 0.3μM and 0.1μM in 1ml. 3. The sensitivity of GA was measured and the receptor was found to exist. 25℃ dark for 4 hours to cultivate seeds 20g PVP, green safety light under the milk pot, milk stick, after the removal of low molecular weight, 2 to make 2 kinds of adsorption 10^<-3>MGA_3 is dissolved in SDS. The result is that the number of entries in the file is different from that of the number of entries in the file. The result is a non-specific adsorption. For example, if you want to change your mind, you should change your mind.