フィトクロム光変換に伴うアポ蛋白質の立体構造変化の単クローン坑体を用いた解析

使用单克隆抗体分析与光敏色素光转化相关的脱辅基蛋白的构象变化

• 批准号: 61540485
• 负责人: 井上 康則
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61540485/
• 关键词: フィトクロム; 光変換; 遷移能率; 単クローン抗体; 偏光

1.測定原理及び装置の開発。Prを角度0度の偏光で励起し、Pfrを誘導した場合、Pr-Pfr間の遷移能率方向がω異なるとすると、励起光と平行並びに直行方向のPfrの吸光度比は以下の関係にある(浜口 私信)。【A_(9θ)】/【A_θ】=(2-【COS^2】ω)/(1-【2COS^2】ω)そこで、分光光度計の測定光路に偏光角を90度変えられる偏光板を設置し、4種類の単クーロン抗体でセファロースに固定したPrに赤色偏光を異なる時間照射し、励起偏光と平行並びに直行する方向でのPfrの730nmにおける吸光度比を測定した。つぎに、この【A_(9θ)】/【A_θ】の値から、予め計算しておいた変換表を用いてωを求めた。2.異なる単クローン抗体で固定した場合の遷移能率変化。フィトクロムの発色団の結合部位に比較的近い部分に識別域を持つと考えられる単クローン抗体mAP-6(Nagatani et al.1984)でフィトクロムを固定した場合、吸光度比は0.83となり、遷移能率は約49度異なる。発色団結合部位とC端の中間に識別域を持つと考えられるmAP-1では、吸光度比は0.98で54度,C端に近いmAP-5では1.00で55度,逆にN端側のmAP-10では1.01で55度となった。これらの結果は、発色団の軸を基準にしてアポタンパク質の構造を考えた場合、PrからPfrへの光変換に伴い、タンパク質は約50度程変化し、かつタンパク質内部では場所による相対位置の変化は数度程度にしかすぎないことを示唆するようにも見えるが、mAP-1,5,10の示す吸光度比はいずれも1に近く、フィトクロムはセファロースにくっついてはいても、歳差運動等は完全には止まって居なかった可能性も考えられる。従来の研究においても、抗体で固定した場合、フィトクロム分子の自由運動がどの程度抑えられていたかの検討は全くなされておらず、従来言われているPr-Pfr間で約30度という値も、今後検討し直すことが、必要と思われる。

1. Determination principle and development of device. When Pr is polarized at an angle of 0 degrees, Pfr is induced, the mobility direction between Pr and Pfr is different, and the absorbance ratio of Pr to Pfr in the direction of excitation is parallel to that in the straight direction is related to the following relationship. [A_(9θ)]/[A_θ]=(2-[COS^2] ω)/(1-[2COS^2] ω)=つぎに、この【A_(9θ)】/【A_θ】の値から、予め计算しておいた変换表を用いてωを求めた。2. The mobility of different antibodies is changed when they are immobilized. In comparison with the binding site of the chromophore, the near middle part of the recognition domain of mAP-6 antibody (Nagatani et al. 1984) has a fixed absorbance ratio of 0.83 and a mobility of about 49 degrees. The absorbance ratio of mAP-1 is 0.98 ° 54 °, that of mAP-5 is 1.00 ° 55 °, and that of mAP-10 is 1.01 ° 55 °. The results are as follows: 1. The light conversion of Pr, Pr, It's a very good idea to have a good time, but it's a very good idea to have a good time. In the future, when the antibody is immobilized, the free movement of the molecule is reduced to a certain extent. In the future, the Pr-Pfr ratio is about 30 degrees. In the future, it is necessary to think about it.

项目成果

Kadata,A.: Plant Cell Physiol.27. 867-873 (1986)

Kadata,A.：植物细胞生理学.27。

Tokutomi,S.: Plant Cell Physiol.27. 765-773 (1986)

Tokutomi,S.：植物细胞生理学.27。