哺乳動物精子のアクロシンの構造と機能について

哺乳动物精子顶体蛋白的结构和功能

• 批准号: 63560072
• 负责人: 新井 勇治
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 1989
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63560072/
• 关键词: アクロシン; セリンプロテア-ゼ; アミノ酸配列; cDNA; ヒト精巣; 精子; 受精; セリンプロテアーゼ; cDNAクローニング; 活性化機構; 精巣

ブタアクロシンcDNAをプロ-ブとして、λgtllをベクタ-としたヒト精巣cDNAライブラリ-をスクリ-ニングした。その結果、8×10^4個の独立クロ-ンより、3個の陽性クロ-ンを得た。得られたcDNAの一つを、各種制限酵素で切断し、制限酵素地図を作成し、それをもとに適当なDNA断片をpUC19、M13ベクタ-にサブクロ-ニングした。ジデオキシ法により全塩基配列の決定を行ったところ、1263塩基対より成る翻訳領域、及びそれにつづく94塩基対の3'-非翻訳領域が見出された。これよりアミノ酸配列を推定したところ、ヒトアクロシンは421個のアミノ酸より成り、ブタアクロシンと高い相同性をもっていることがわかった。特に、アミノ末端から75残基までの領域では、両者の間では75%の相同性を示した。アミノ末端の前には、疎水性の強いアミノ酸19残基があり、これは、膜透過の際必要なシグナルペプチドであると推測された。ブタアクロシンで見られた、活性残基ヒスチジン、アスパラギン酸、セリン、及びシステイン残基、N結合型糖鎖付加アルパラギン残基は、すべて保存されていた。カルボキシル末端付近には、プロリンに富む領域を有し、この領域をコ-ドする配列中にはcccccAを基調とする繰り返し配列が見出された。以上の結果から、ヒトアクロシンは、ブタアクロシンと同様に、各々、アミノ酸23個、379個から成る軽鎖と重鎖から構成されていることが考えられた。ヒトアクロシンを、ヒト由来の他のセリンプロチア-ゼと比較したところ、アミノ酸24残基から270〜290残基の間の領域で、30〜53%の相同性が見られた。カルボキシル末端側の領域では、他のセリンプロチア-ゼとの相同性は見られなかった。

ブ タ ア ク ロ シ ン cDNA を プ ロ - ブ と し て, lambda GTLL を ベ ク タ - と し た ヒ ト fine 巣 cDNA ラ イ ブ ラ リ - を ス ク リ - ニ ン グ し た. The results of そ <s:1>, 8×10^4 independent <s:1> ロ ロ- よ よ よ, and 3 positive <s:1> ロ- <e:1> を, result in た. Have ら れ た cDNA の a つ を limitations, various enzymes で cut し limitations, enzyme to 図 を し, consummate そ れ を も と に な appropriate DNA fragment を pUC19, M13 ベ ク タ - に サ ブ ク ロ - ニ ン グ し た. ジ デ オ キ シ method に よ り salt base full column line の decided を っ た と こ ろ, 1263 salt base よ seaborne り into る 訳 field, and び そ れ に つ づ く 94 salt base の seaborne 3 '- not turn が 訳 field shows さ れ た. こ れ よ り ア ミ ノ acid with column を presumption し た と こ ろ, ヒ ト ア ク ロ シ ン は 421 の ア ミ ノ acid よ り り, ブ タ ア ク ロ シ ン と high い identity を も っ て い る こ と が わ か っ た. に, ア ミ ノ end か ら 75 residues ま で の field で は, struck between の で は 75% gay を の phase in し た. ア ミ ノ before end の に は strong, water-based 疎 の い ア ミ 19 ノ acid residues が あ り, こ れ は, membrane through the event の necessary な シ グ ナ ル ペ プ チ ド で あ る と speculation さ れ た. ブ タ ア ク ロ シ ン で see ら れ た, reactive residue ヒ ス チ ジ ン, ア ス パ ラ ギ ン acid, セ リ ン and び シ ス テ イ ン residues, N combined with sugar plus lock ア ル パ ラ ギ ン residues は, す べ て save さ れ て い た. カ ル ボ キ シ ル end paying nearly に は, プ ロ リ ン に を し, rich む field こ の field を コ - ド す る match column に は cccccA を tone と す る Qiao り return し match column が shows さ れ た. の above results か ら, ヒ ト ア ク ロ シ ン は, ブ タ ア ク ロ シ ン と with others に, each 々, ア ミ ノ acid 23, 379 か ら into る 軽 lock と heavy lock か ら constitute さ れ て い る こ と が exam え ら れ た. ヒ ト ア ク ロ シ ン を, ヒ ト origin の he の セ リ ン プ ロ チ ア - ゼ と compare し た と こ ろ, ア ミ 24 ノ acid residues か ら between 270 ~ 290 residues の の で, 30 ~ 53% gay が の phase see ら れ た. Youdaoplaceholder0 ボキシ ボキシ ボキシ で the terminal side of <s:1> the domain で られな and the other side セリ セリ プロチア-ゼと <s:1> are similar られな to られな ボキシ った った った った ゼと ゼと ゼと った.

项目成果

Tadashi,Baba: Biochem.Biophys.Res.Commun.

巴巴正：Biochem.Biophys.Res.Commun。

Tadashi Baba: "Primary structure of human proaccosin deduced from its cDNA sequence" FEBS letters. 244. 296-300 (1989)

Tadashi Baba：“从 cDNA 序列推导出的人阿古斯素原的一级结构”FEBS 字母。

Tadashi,Baba: FEBS Letter. 244. 132-136 (1989)

爸爸，Tadashi：FEBS 的信。

Tadashi Baba: "Activation of Boar Proacrosin is effected by processing at both N-and C-terminal portions of the zymogen molecule" FEBS letters. 244. 132-136 (1989)

Tadashi Baba：“公猪顶体素原的激活是通过酶原分子 N 端和 C 端部分的加工来实现的”FEBS 字母。

Tadashi Baba: "Proacrosin activation in the presence of a 32kDa protein from boar spermatozoa" Biochemical and biophysical research communications. 160. 1026-1032 (1989)

Tadashi Baba：“公猪精子中 32kDa 蛋白质存在时顶体素激活”生物化学和生物物理研究通讯。