ドット・ブロットハイブリダイゼーションによる牛白血病ウィルスの検出法

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ウシ白血病ウィルス (BLV) の感染によって引き起こされるウシ白血病 (EBL) は近年激増しており、経済的に重要な問題となってきている。BLVが一度感染するとリンパ球内のDNAに組み込まれプロウィルスの形で一生感染源になると言われている。しかしながら、飼育牛のBLVプロウィルスの保有状況についての知見は少なく、これがEBVの発症機構、防禦対策又BLVの公衆衛生上の不明瞭なものとしている。一方、プロウィルスの検出にはプローブの標識にラジオアイソトープを用いるなど普及するには技術的にいくつかの問題点も残されている。ここでは、以下の方法に従って非アイソトープを用いたBLVプロウィルスの検出法を検討した。〓BLVのフラグメントBLV-1を挿入したプラスミドPBR322を持つ大腸菌 (理化研井川博士より分与) からプラスミドDNAを抽出した。〓このプラスミドを制限酵素EcoR1、Sal-1、で切断して電気泳動を行い6.8Kbのフラグメントを回収してプローブ用DNAとした。〓熱変性させたプローブDNAを非放射性POD (ペルオキシダーゼにポリエチレンイミンを化学的に結合) で標識したPOD-標識プローブを用いた。〓BLV-産生培養FLK細胞、白血病牛の血液リンパ球、肩前リンパ節よりDNAを抽出し、これらのDNAをバイオダインAメンブランにドット・ブロットを行った後、プローブを反応させ、酵素発色液を添加してプロウィルスを検出したところ、250ng以上ドット・ブロットしたすべてのDNAで検出された。尚、対照として市販の牛胸腺DNA、ニワトリリンパ球DNAでは発色しなかった。又、この知見はアイソトープを用いたサザン法の成績と一致した。〓以上の知見と、本法がBLVプロウィルスを短時間に、特別な施設なく検出出来る事を示すものである。〓BLV抗体陰性牛のDNAにもBLV-プロウィルスが検出され、BLVの広い汚染が示唆された。