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浮遊培養細胞による牛白血病ウィルス抗原の調製と抗体調査

悬浮培养细胞制备牛白血病病毒抗原及抗体研究

基本信息

批准号：
61560293
负责人：
猪岡尚志
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ウシの腫瘍であるリンパ肉腫は近年激増しており経済的に多大な被害をもたらしている。特に成牛型白血病(BL)はレトロ科の牛白血病ウィルス(BLV)感染によって起因するが、感染から発症への経過は必ずしも明らかではない。本研究ではBLV-持続産生細胞と培養生活細胞混合系をBLV感染のモデル系として用い感染に伴う生活細胞による物質群(BLVを含む)の産生検索を行い、更に高密度連続細胞培養を行いこれらの物質を大量に採取し、BL発症との関連性を明らかにする。混合培養は浮遊性細胞であるNamarva細胞等2〜3の細胞株を用いて検討したが、これらのうちマクロファージ系細胞(J774細胞)で興味ある現象を見出したので追求した。すなわち、付着性細胞であるBLV-持続産生FLK細胞と付着性の弱いJ774細胞との混合培養を行い、2〜4日毎に継代を行った。この生活細胞(以降Co-J774細胞)のBLV産生の有無をシンシチウム形成標的細胞であるC8細胞に加えたところ、シンシチウム形成以前にC8細胞が破壊される現象を見出した。この傷害活性はCo-J774細胞継代100代以上を越えて持続的に安定して認められた。この事はBLVのゲノムがJ774細胞のクロモゾームに取込まれJ774細胞が常時活性化している事を示唆している。傷害因子は分子量60,000前後の腫瘍壊死因子様物質と10,000前後の2種類を含むが、活性は後者に強く認められた。又、傷害活性は、C8細胞のみならずL-929,L-M細胞等に認められたがウィルスゲノムを含むC8細胞には最も感受性であった。Co-J774細胞をマウス腹腔内に注入し付着性の弱いほぼ浮遊状のCo-J774細胞を選抜培養した。この細胞一部付着性BLV-FLK細胞をも使用して傷害因子及びウィルスを高密度連続培養装置を用いて採取しており、現在、抗体価の調査、傷害因子の臨床上の役割について検討を急いでいる。

The number of people killed in recent years has increased dramatically. Bovine Leukemia (BL) is a highly infectious disease caused by bovine leukemia (BLV). In this study, BLV-producing cells, culture of living cell mixtures, BLV infection, infection, production of substance groups associated with living cells (BLV), and high-density continuous cell culture were studied. 2 - 3 cell lines such as planktonic cells (Namarva cells) were cultured in a mixed culture. BLV-dependent FLK cells and dependent J774 cells were cultured in a mixed culture for 2 to 4 days. BLV production in living cells (e.g. Co-J774 cells) and the presence or absence of BLV formation in target cells were observed in C8 cells prior to BLV formation. This injury activity is more than 100 generations of Co-J774 cells. This is the reason why BLV needs to be activated in J774 cells. The injury factors include two kinds of carcinogenic substances around molecular weight 60,000 and two kinds of active substances around molecular weight 10,000. In addition, injury activity, C8 cells and L-929,L-M cells are recognized as the most sensitive cells, including C8 cells. Co-J774 cells were injected into the abdominal cavity and cultured in a selective manner. Some of these cells are dependent on BLV-FLK cells for the use of injury factors and their presence in high-density continuous culture devices.