ヒト肝癌細胞により分泌されるNovel lipoproteinの研究

Human hepatoma cell line(HuH-7)のmedium中に分泌されるlipoproteinのlipidはd.<1.063g/ml fraction3.5%、d.1.063〜1.210g/ml fraction 70.9%、d>1.210g/ml fraction 23.6%の分布を示した。またapolipoproteinA-I(apoA-I)、A-II(apoA-II)、B(apoB)及びE(apoE)の各々も各fractionすべてに認められた。それ故ヒト血漿のように超遠心による分画では数種のlipoproteinが混在しているため、我々はaffinity columnを用いて特にapoB及びapoA-I-containing lipoproteinを精製し、その性状を検討した。以前報告した結果に加えてapoB-containing lipoproteinはSDS-PAGE及びimmunoblbotによりapo B-100を所有していることが明らかになった。またこのlipoproteinはagar gel electrophoresisにて一部anode側に泳動されたが、agar gel electrophoresisにてanode側に泳動されるlipoproteinX及びYとは明らかにその性状は異なっていた。このlipoproteinは血漿LDLと同様ConcanavalinAと反応するが血漿LDLとは異なってRicinus communis agglutininとは反応しなかった。このことは少なくともapo B-containing lipoproteinの表面に存在するcarbohydrateはD-galactoseを含んだsugar chainが無いか非常に少ないことを示唆しているものと思われた。一方apo A-I-containing lipoproteinはagarose gel electrophoresisにてα-lipoproteinより遅く泳動されmain bandはpre betaの位置に認められた。このlipoproteinはprotein/lipid比が約4.8でfree cholesterol、triglyceride及びphospholipidを所有していたがcholesteryl esterは明らかではなかった。またこのlipoproteinのapo A-Iは12.5%、SDS-PAGE及びそのimmunoblotにて血漿HDLのapo A-Iと同じ移動度を示した。Isoelectric focusing gel electrophoresis及びそのimmunoblotでもapo A-I_4、apo A-I_5、apo A-I_6が認められた。Hep G-2のmedium中ではapo A-I_2及びapo A-I_3のみの存在が認められているため、HuH-7のmedinm中にapo A-I_2のNH_2-terminal hexo-peptideを切断するproteaseが存在しているものと思われた。

Human hepatoma cell line(HuH-7)のmedium中に分泌されるlipoproteinのlipidはd.<1.063g/ml fraction3.5%、d.1.063〜1.210g/ml fraction 70.9%、d>1.210g/ml fraction 23.6%の分布を示した。またapolipoproteinA-I(apoA-I)、A-II(apoA-II)、B(apoB)及びE(apoE)の各々も各fractionすべてに認められた。それ故ヒト血漿のように超遠心による分画では数種のlipoproteinが混在しているため、我々はaffinity columnを用いて特にapoB及びapoA-I-containing lipoproteinを精製し、その性状を検討した。以前報告した結果に加えてapoB-containing lipoproteinはSDS-PAGE及びimmunoblbotによりapo B-100を所有していることが明らかになった。またこのlipoproteinはagar gel electrophoresisにて一部anode側に泳動されたが、agar gel electrophoresisにてanode側に泳動されるlipoproteinX及びYとは明らかにその性状は異なっていた。このlipoproteinは血漿LDLと同様ConcanavalinAと反応するが血漿LDLとは異なってRicinus communis agglutininとは反応しなかった。このことは少なくともapo B-containing lipoproteinの表面に存在するcarbohydrateはD-galactoseを含んだsugar chainが無いか非常に少ないことを示唆しているものと思われた。一方apo A-I-containing lipoproteinはagarose gel electrophoresisにてα-lipoproteinより遅く泳動されmain bandはpre betaの位置に認められた。このlipoproteinはprotein/lipid比が約4.8でfree cholesterol、triglyceride及びphospholipidを所有していたがcholesteryl esterは明らかではなかった。またこのlipoproteinのapo A-Iは12.5%、SDS-PAGE及びそのimmunoblotにて血漿HDLのapo A-Iと同じ移動度を示した。Isoelectric focusing gel electrophoresis及びそのimmunoblotでもapo A-I_4、apo A-I_5、apo A-I_6が認められた。Hep G-2のmedium中ではapo A-I_2及びapo A-I_3のみの存在が認められているため、HuH-7のmedinm中にapo A-I_2のNH_2-terminal hexo-peptideを切断するproteaseが存在しているものと思われた。