金属クラスター化合物によるヘルペスウイルス再活性化阻止機構の解明ー蛍光顕装置による免疫組織学的アプローチー

阐明金属簇化合物抑制疱疹病毒再激活的机制 - 使用荧光显微镜的免疫组织学方法 -

• 批准号: 63570798
• 负责人: 福間 真理子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63570798/
• 关键词: 金属クラスター; 抗ヘルペスウイルス物質; 潜伏感染; 再活性化; 蛍光顕微測光; DAPI染色; acridineorange染色

金属クラスター化合物のタングステン酸塩に強い抗ウイルス作用を見出したので、63年度は単純疱疹ウイルス(HSV)の増殖及び潜伏感染からの再活性に対する作用を蛍光測光法を用いて検討し、以下の結果を得た。用いた細胞はVero細胞、人胎児二倍体細胞(Flow 2000、MRCー5)で、マウスはBalb/c 5週令雌を用いた。蛍光測光装置はOSPー1(オリンパス)を用いた。PMー19(K_7Ti_2・W_<18>PO_<40>・6H_2O)は、5μg/mlでHSVー1型、2型のの増殖をほぼ50%抑制し、Vero細胞に対する50%細胞増殖阻止濃度は500μg/ml以上であったので化学療法系数は約100であった。acyclovir耐性株に対しても感受性株と同様に抑制作用があり、acyclovirとは作用が異なることが示唆された。PMー19はウイルス直接不活化作用はなく、細胞を前処理しても作用は発現しないので、HSV増殖過程のどこかを阻止していると思われる。MRCー5にHSVを感染させDAPIで核染色をすると6時間目には核内DNAの有意の増加が見られ(対照:感染=2.008:2.077n、p<0.01)10時間で核構造の変化が見られた。PMー19処理により24時間まで感染細胞におけるDNA量は変化がなく核構造も正常であった。又、HSVのNP40ー45抗原の発現も完全に抑制した。培養細胞における潜伏感染系および神経節の器官培養で再活性化するウイルスにも阻止活性を示した。In vivoでcyclophosphamide(CY)前処理した免疫抑制マウスにおいて60%のマウスが感染死より免れた。又、CYーHSV感染マウスのDTH反応を増強した。CYーHSV感染マウスの末梢リンパ球のRNAとDNA比をacridineorange染色により蛍光測光をすると感染マウスで有意のRNA量の増加が認められた(0.466:0.532、p<0.001)。PMー19の抗ウイルス作用はウイルス増殖に対してのみではなく、生体防御機構を介してより有効に働くと考えられる。これら活性化されたリンパ球の表面抗原を分析し、PMー19の免疫系に対する作用を詳細に検討する。

The strong anti-HSV effect of metal compounds was observed in the presence of various acids. In 1963, the effects of HSV on the proliferation and reactivation of latent infections were investigated by spectrophotometry. The following results were obtained. Vero cells, human fetal diploid cells (Flow 2000, MRC-5), Balb/c 5 weeks old female cells OSP-1(optional) PM 19(K_7Ti_2·W_<18>PO_<40>·6H_2O) inhibited the proliferation of HSV type 1 and type 2 by 50% at concentrations of 5μg/ml and inhibited the proliferation of Vero cells by 50% at concentrations above 500μg/ml. Acyclovir resistant plants have the same inhibitory effect as acyclovir resistant plants. PM 19 is the direct activation of HSV, the pre-treatment of HSV, and the prevention of HSV proliferation. MRC 5 HSV infection, DAPI nuclear staining, 6 time point, intentional increase in nuclear DNA was observed (contrast: infection =2.008:2.077n, p&lt;0.01), 10 time point, nuclear structural change was observed. PM 19 treatment is 24 hours long and the DNA quantity of infected cells is changed. The nuclear structure is normal. In addition, HSV NP40 - 45 antigen was completely inhibited. Latent infection of cultured cells and reactivation of neurons in organ culture In vivo, cyclophosphamide(CY) was used to suppress immune responses by 60% of the infected individuals. In addition, HSV infection and DTH response increased. CYHSV infection was detected by PCR and DNA staining. The results showed that the RNA content of HSV infection was significantly increased (0.466:0.532, p&lt;0.001). PM 19's anti-virus function is to increase the number of bacteria in the body, and to protect the body from bacteria. The surface antigen analysis of the activated protein and the immune system of PM-19 were discussed in detail.

项目成果

Mariko Fukuma;et al.: Japanese Journal of Pharmacol. 49. 72 (1989)

Mariko Fukuma 等人：日本药理学杂志。