ペルオキシダーゼ標識インスリンによる抗インスリン抗体の分析

使用过氧化物酶标记的胰岛素分析抗胰岛素抗体

基本信息

  • 批准号:
    63571022
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.28万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1988
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1988 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

インスリン上の酵素標識部位が明確なる種類のペルオキシダーゼ(HRP)標識インスリン(GlyAl,LysB29-及びGlyA1,LysB29-HRP-インスリン)を調製し、これを用いて、サンドイッチ法による抗インスリン抗体の測定法を新たに開発した。さらに、インスリン上の1箇所にHRP標識したコンジュゲートは2箇所標識に比べて高感度が得られることを初めて実験で示した。測定操作法の概要:抗インスリン抗体を含む溶液100μlにNa,k-リン酸塩緩衝液(10mM,pH7.0,100mMNaCl,1mMMgCl_2,0.1%BSA含有)200μl及びィンスリン結合ビーズ(6mm径)を加えて4℃24h静置する(第1反応)。精製水2mlで2回ビーズを洗浄後、HRP-インスリン溶液300μl中に移し、4℃、3h静置する(第2反応)。精製水2mlで2回洗浄後、ビーズ上のHRP活性を測定するため、ビーズをトリス塩酸緩衝液(0.15M、pH8,5)700μl、HPPA水溶液(60mM)350μlの混液中に投入し、H_2O_2(40mM)70μlの添加で反応を開始し、30℃、30分後、Na_2SO_3(10(w/v)%)70μlを加えて反応を停止後、励起波長320nm、蛍光測定波長404nmにおける蛍光強度を測定する。3種類のHRP標識インスリンを用いて抗インスリン抗体の測定を行なった。モルモット抗インスリン血清またはモルモット抗インスリンポリクローナル抗体をサンプルとしたものはシグモイド型の標準曲線を与え、一方、マウス抗インスリンモノクローナル抗体(A8-A10を良く認識)の場合には直線に近い標準曲線が得られた。いずれの場合にも、GlyA1またはLyoB29を介してHRP標識したものが高感度を与えた。以上の結果は、これまで予想はされていたが、今回、標識部位の明確なHRP-インスリンを使用することにより、初めて実験システムを組み得たことにより得られたものであり、エンザイムイムノアッセイ開発に寄与する有用な知見を得た。
A new method for the determination of anti-HRP antibodies has been developed by using the enzyme identification site on the enzyme (GlyAl, LysB29-and GlyA1, LysB29-HRP) to modulate and identify the enzyme identification site. 1 HRP logo on the screen 2 HRP logo on the screen Summary of the assay procedure: 100μl of Na, k-rinic acid buffer (10 mM, pH 7.0, 100 mM NaCl, 1 mM MgCl_2, 0.1% BSA) and 200μl of anti-rinic antibody binding solution (6mm diameter) were added to 4℃ and allowed to stand for 24h (1st reaction). After washing with 2ml of purified water for 2 cycles, 300μl of HRP-100 solution was transferred to 4℃ and allowed to stand for 3h (second cycle). Purified water 2ml, 2 times after washing, HRP activity on the sample was measured. 700μl (0.15M, pH8,5) and 350μl HPPA aqueous solution (60mM) were added to the mixture. After 30 minutes at 30℃, 70μl Na_2SO_3(10(w/v)%) was added to the mixture and the reaction was stopped. The excitation wavelength was 320nm and the fluorescence wavelength was 404nm. 3. HRP identification and detection of anti-HRP antibodies The standard curve of the anti-virus serum type is opposite to the standard curve of the anti-virus serum type (A8-A10), and the standard curve of the anti-virus serum type is opposite to the standard curve of the anti-virus serum type (A8-A10). In the case of GlyA1, LyB 29, the HRP logo is highly sensitive. The above results are expected to be useful for identifying HRP-1 sites and for identifying HRP-1 sites.

项目成果

期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Kiyoshi Zaitsu.;Masao Nakayama.;Yosuke Ohkura.: Jpn.J.Clin.Chem.
Kiyoshi Zaitsu.;Masao Nakayama.;Yosuke Ohkura.:Jpn.J.Clin.Chem。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
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    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Kiyoshi Zaitsu.;Masao Nakayama.; Yosuke Ohkura.: Chem.Pharm Bull.
Kiyoshi Zaitsu.;Masao Nakayama.;
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知道了