精巣20β-ヒドロキシステロイド脱水素酵素の諸性質と内分泌機能への関与

睾丸20β-羟基类固醇脱氢酶的特性及其与内分泌功能的关系

• 批准号: 63571063
• 负责人: 中陳 静男
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Hoshi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63571063/
• 关键词: 精巣; 20β-ヒドロキシステロイド脱水素酵素; 酵素科学的性質; 20β-HSD; 内分泌機能

著者は20β-ヒドロキシステロイド脱水素酵素(20β-HSD)を幼著なブタ精巣に多量に見い出したわけであるが、本酵素の諸性質を明らかにする目的で10日令のブタ精巣を原料として細胞分画し、サイトソールより各種カラムクロマトグラフィーを行ない本酵素を電気泳動的に均一な成分として純化することができた。本酵素は分子量30、500、等電点5.2の糖を含まないタンパク質で、そのアミノ酸組成においてAsp、Gluの他にPro、Gly、Val、Leuの疎水性アミノ酸が比較的多く認められた。また本酵素は17αーhydroxyprogesterone(Km=9.4μM)を最も基質として20β-ヒドロキシ体に還元することができるが、その他、progesterone(Km=1.5μM)、pregnenolene(Km=4.0μM)、deoxycorticosterone(Km=8.6μM)およびdeoxycortisolも基質とした。本酵素は補酵素としてβ-NADPH(Km=1.7μM)を最も要求するがβ-NADH(Lm=1.0mM)も比較的高濃度で補酵素と成り得た。またその還元反応の際、β-NADPHの4-pro-Sの水素を立体選択的に利用した。本酵素に対する各種阻害薬を検討した結果spilonolactone(Ki=11.2μM)、SU8000(Ki=22.3μM)およびcyanoketone(Ki=42.8μM)などにより比較的強い競合的阻害を受けることが明らかになった。次に本酵素の生理学的な意義を明らかにする一端として本酵素による反応生成物の精巣チトクロームP-450(17α-ヒデロキシラーゼ/リアーゼ)に対する影響を検討した。その結果、20β-hydoroxypregn-4en-3-oneおよび3β、20β-dihydroxypregn-5-eneは17α-ヒドロキシラーゼ/リアーゼ活性を強力に阻害することを明らかにした。さらにこの20β-ヒドロキシ体は直接P-450に相互作用することにより、特徴的な誘導差スペクトルを与えることなどから20β-HSDの反応生成物はC_<19>-ステロイドからC_<21>-ステロイドの生合成に対して抑制的に働いていると考えられた。

Author は 20 beta ヒ ド ロ キ シ ス テ ロ イ ド dehydrated vegetable enzyme (20 beta HSD) を young the な ブ タ fine 巣 に に see い out abundant し た わ け で あ る が nature, this enzyme の を Ming ら か に す る purpose makes の で 10 ブ タ fine 巣 を materials と し て cells draw し, サ イ ト ソ ー ル よ り various カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー を line な い Ben Purification of に homogeneous な components of enzyme を electrokinetic activity と て て する する とがで た た た. This enzyme は molecular weight 30, 500, isoelectric point 5.2 の contains sugar を ま な い タ ン パ ク で, そ の ア ミ ノ acid composition に お い て Asp, Glu の he に Pro, Gly, Val, Leu の 疎 water-based ア ミ ノ acid が comparison of many く recognize め ら れ た. ま た this enzyme は 17 alpha ー hydroxyprogesterone (k = 9.4 microns) を most も matrix と し て 20 beta ヒ ド ロ キ シ body に also yuan す る こ と が で き る が, そ の him, progesterone (Km = 1.5 microns), pregnenolene (Km = 4.0 microns), deoxycorticosterone(Km=8.6μM)およびdeoxycortisol glycomatrix と た. This enzyme は repair enzyme と し て beta NADPH (Km = 1.7 microns) を most も requirements す る が beta NADH (Lm = 1.0 mM) も comparative high concentrations of と で repair enzyme into り た. The に utilization of に and た た for the を stereoselective 択 of またそ <s:1> reducing 応 <e:1> and β-NADPH <e:1> 4-pro-S <e:1> hydrogens. This enzyme に す seaborne る various resistance against 薬 を beg し 検 た results spilonolactone (Ki = 11.2 microns), SU8000 (Ki = 22.3 microns) お よ び cyanoketone (Ki = 42.8 microns) な ど に よ り relatively strong い competing resistance against を by け る こ と が Ming ら か に な っ た. Time に な significance of this enzyme の physiology を Ming ら か に す る end と し て this enzyme に よ る anti 応 products の fine 巣 チ ト ク ロ ー ム P - 450 (17 alpha ヒ デ ロ キ シ ラ ー ゼ / リ ア ー ゼ) に す seaborne る influence を beg し 検 た. そ の result, 20 beta - en hydoroxypregn - 4-3 - one お よ び 3 beta, 20 beta dihydroxypregn - 5 - ene は 17 alpha ヒ ド ロ キ シ ラ ー ゼ / リ ア ー ゼ active を powerful に resistance against す る こ と を Ming ら か に し た. さ ら に こ の 20 beta ヒ ド ロ キ シ body は direct P - 450 に interaction す る こ と に よ り, 徴 な inducing poor ス ペ ク ト ル を and え る こ と な ど か ら 20 beta HSD の anti 応 products は C_ < > 19 - ス テ ロ イ ド か ら C_ < 21 > - ス テ ロ イ ド の biosynthesis に し seaborne て inhibition of に 働 い て い る と exam え ら れ Youdaoplaceholder0.

项目成果

中陳静男、大野修司、青木正忠、篠田雅人: 薬学雑誌. 108. 1219-1222 (1988)

Shizuo Nakachin、Shuji Ohno、Masatada Aoki、Masato Shinoda：制药杂志 108。1219-1222 (1988)。

Shizuo Nakajin;Shuji Ohno;Masato Shinoda.: J.Biochem.104. 565-569 (1988)

Shizuo Nakajin；Shuji Ohno；Masato Shinoda.：J.Biochem.104。

中陳静男、高橋一彰、篠田雅人: 薬学雑誌. 108. 1188-1195 (1988)

Shizuo Nakachin、Kazuaki Takahashi、Masato Shinoda：制药杂志 108。1188-1195 (1988)。

Shizuo Nakajin;Shuji Ohno,;Masatada Aoki,;Masato Shinoda: Chem.Pharm.Bull.37. 148-150 (1989)

Shizuo Nakajin；Shuji Ohno，；Masatada Aoki，；Masato Shinoda：Chem.Pharm.Bull.37。