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NDPキナーゼの機能解析と遺伝子の単離

NDP激酶的功能分析和基因分离

基本信息

批准号：
63580133
负责人：
木村成道
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63580133/
关键词：
NDPキナーゼタンパク質一次構造遺伝子

项目摘要

NDPキナーゼはATP以外の(d)NTP産生を行い、生体成分合成の多様な反応に関わる。私共は最近本酵素が膜情報伝達系の必須調節因子GTPの供給系として機能している可能性を見出した。本研究はこれ等多様な役割をもつと推定される本酵素について、酵素蛋白化学、遺伝子構造の解析を主な目的として行われた。本研究は研究計画に沿って進められた。以下にその概要をまとめる。1).細胞質性酵素の精製については、私共の手による既報の方法に加え、FPLCを使用したイオン交換、ゲルロ過カラム法などの有効性を確認するとともに、これ等の方法に準じて酵素精製を行った。2).NDPキテーゼの部分的アミノ酸配列を明らかにするため、精製酵素をリシルエンドペプチダーゼ消化し、得られたペプチド断片を逆相カラムを用いたHPLCにて分離した。このうち4種のペプチドについてアミノ酸配列が判明した。3).次にアミノ酸配列の判明したペプチド1種について、対応する予想されるヌクレオチド配列をもつオリゴヌクレオチドの作成を行った。この際、プローブとして48マーオリゴヌクレオチド一種および17マーヌクレオチド混合物の2通りのものを用意した。必要に応じて更に有効性の高いプローブの作成を考慮中である。現在、利用可能なCDNAライブラリーの検討、およびNDPキナーゼCDNAクローニングに向けて必要な準備を進めている。以上のごとく、本研究は未だ完結をみるに至ってないが、着実な進展をみることができ、これ迄に得られた実績は貴重なものであることは言をまたない。今後本研究課題を継続して進めるとともに、完成に向けて努力する予定である。

(d)NTP production in addition to ATP, and multiple reactions related to the synthesis of biological components. Recently, the possibility of GTP supply system, an essential regulator of membrane information transfer system, has been revealed. This study focuses on the analysis of enzyme structure, enzyme protein chemistry and gene structure. This study was conducted along the research plan. The following is a summary of the results. 1). The purification of cytoplasmic enzymes is carried out by methods such as addition, use of FPLC, exchange, and confirmation of efficiency. 2).NDP is a part of the acid sequence, purification enzyme is a part of the enzyme sequence, purification enzyme is a part of the enzyme sequence, purification enzyme is a part of the enzyme sequence. The four kinds of acid combinations were identified. 3). The next step is to determine the acid allocation and make a decision. At the same time, the mixture of two channels is used for the first time. It is necessary to consider how to make a better choice. Now, use the possibility of CDNA detection, NDP detection, CDNA detection and necessary preparation. The above is not the end of this study. In the future, this research topic will be further developed and completed.