兎骨格筋のミオシンの分子構造と機能(エキサイマーによる両者の相関の解明)

兔骨骼肌肌球蛋白的分子结构和功能（用准分子阐明两者之间的关系）

基本信息

批准号：
63580215
负责人：
一海孝光
金额：
--
依托单位：
Aichi Prefectural University of Fine Arts and Music
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

筋収縮時の分子構造変化の中心的な場所として、ミオシン頭部のドメイン(27K、50K、20K)の相対的位置の変化が重要になってきた。エキサイマーはこの種の動きを調べるのに大へん有力な方法である。なぜならばエキサイマーは二つの蛍光色素間の相互作用によって生じるため、二つのドメイン間に出来たエキサイマーを見れば、それらの間の相対的位置変化を知ることができるからである。今回の実験に於いては、蛍光色素PIAをミオシンの頭部であるSlに結合させ、ラべルに伴うエキサイマーの発現とATPaseの活性の変化を調べた。比較の為にエキサイマーを生じる蛍光色素として広く知られているPMIもラべルしてみた。大変興味深いことにPIAはエキサイマーを生じるが、PMIはそれをほとんど生じない。この原因の一つにはラべルされるシスティンの主鎖上の場所が、両者の間で異っていることが考えられる。事実ラべルに伴うCa-ATPaseの時間変化を見ると、PMIではSHlのラべルによる活性の促進が見られるが、PIAでは最初活性の抑制が見られ、それからSHlのラべルによる活性の弱い回復がゆっくりと現われる。この時初めに得られたエキサイマーがゆっくりと減少していく。Slをトリプシン分解してゲル上の蛍光を調べると、20Kと50Kのフラグメントが蛍光を示す。従ってエキサイマーは20Kと50Kの夫々のドメイン上の色素間で作られている。このようなPIA-Sl分子を加圧したり温度を変えてエキサイマーを調べると、ドメイン間の相互作用の様子が明らかになってくる。20℃近辺でSlのドメイン間にその相互作用の急激な変化が現われることが明らかになってきた。この変化がATPase活性の変化とどう結びつくのかが今後の課題である。

肌球蛋白头域（27K，50K，20K）的相对位置的变化已成为肌肉收缩期间分子结构变化的中心位置。准分子是研究这种运动的一种非常有力的方法。这是因为准分子是由两种荧光染料之间的相互作用引起的，并且通过查看两个域之间形成的准分子，可以看到它们之间的相对位置变化。在该实验中，荧光染料PIA与SL结合了SL，肌球蛋白的头部，并在Lavel中研究了准分子的表达和ATPase活性的变化。为了进行比较，我们还抓住了PMI，该PMI被广泛称为荧光染料，产生了准分子。 PIA产生准分子非常有趣，但是PMI很少产生。这样做的原因之一是，标记的西斯汀主链的位置在两者之间是不同的。实际上，查看与薰衣草相关的CA-ATPase的时间变化时，PMI表明SHL的活性是由Lavels促进的，但是PIA显示了对活性的初始抑制，然后缓慢地表现出SHL活性的缓慢恢复。开始时获得的准分子缓慢降低。将SL胰蛋白酶胰蛋白酶用于检查凝胶上的荧光，而在20K和50K处的碎片显示荧光。因此，在每个20K和50K的域上的染料之间制成准分子。当通过加压和改变此类PIA-SL分子的温度来检查准分子时，域之间的相互作用变得清晰。很明显，其相互作用的突然变化发生在20°C左右的SL域之间。未来的挑战是如何将这种变化与ATPase活动的变化联系起来。