ル-メンプロトゾアおよびル-メンバクテリアのリジン合成酵素の比較生化学的研究

瘤胃原虫和瘤胃细菌赖氨酸合酶生化比较研究

• 批准号: 01560311
• 负责人: 小野寺 良次
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: University of Miyazaki
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01560311/
• 关键词: ル-メンプロトゾア; ル-メンバクテリア; ジアミノピメリン酸脱炭酸酵素; リジン合成

平成元年度の研究計画に沿って、混合ル-メンプロトゾア(RP)および混合ル-メンバクテリア(RB)のジアミノピメリン酸脱炭酸酵素(DDC)-リジン合成酵素-活性を検討し、以下の結果が得られたので、報告する。ヘイキュ-ブと濃厚飼料(3:1)を給与している山羊のル-メン内容物からRPおよひRBを集め、超音波により細胞を破壊して、その遠心分離上清液を粗酵素液として用い、DDCの性質を両者間で比較した。DDC活性の測定には、他の微生物による研究に倣って、ピリドキサルリン酸(PLP,0.1mM)を添加し、また、基質としてジアミノピメリン酸(DAP)を3mMとなるように添加した。まず、遠心分離分画の酵素活性をみると、RPでは上清液のみならず沈澱画分にもかなりの活性がみられ、細胞内では、PRのDDCは膜または細胞内顆粒に結合しているものと考えられた。これに対して、RBでは上清中にほとんどの活性が現れた。また、DDCは、RPおよびRBともに酸素に弱く、還元剤の添加で復活する傾向があったので、DDC活性の測定には0.1%2-メルカプトエタノ-ルを常に添加することにした。次に、最適pHを検討した結果、RPでは6.3、RBではE.coliに近い6.8であった。最適温度は、RPで50℃付近、RBで45℃付近であった。いずれもル-メン内温度よりもかなり高い値であった。基質親和性の検討結果では、Km値は、RPで0.976mM、RBで1.119mMとなり、RPの方がやや親和性が高いと考えられた。次に、RPの膜結合酵素の可溶化を検討し、0.5%Triton X-100により可溶化されることが分かった。最後にRPについてのみ、ゲル濾過法(Sephadex G-100)によるDDCの分子量の推定を行なった結果、約170,000という値が得られた。これは、E.coliのそれに近い値であった。以上の結果から、RPのDDCの性質は、RBのそれとは全く異なることが分かり、これはRP固有の酵素と考えられた。

The activity of acid decarboxylase (DDC)-decarboxylase synthase was investigated in the first year of Heisei research project. The results below were reported. In addition, the content of RP-RB, ultrasonic wave, cell disruption, and other remotely-isolated supernatant were compared between the crude enzyme solution and DDC properties. DDC activity was determined by adding PLP (0.1 mM) to other microorganisms and adding DAP (3mM) to substrates. The enzyme activity of the intracellular and extracellular fractions of the RP and PR was determined by the enzyme activity of the supernatant and intracellular fractions of the PR and DDC. The activity of the RB is shown in the upper clear. DDC, RP, RB, acid, weak acid, weak The optimum pH was 6.3 and RB was 6.8. The optimum temperature is near RP <$50 ℃ and RB <$45 ℃. The temperature inside the box is high. The results of matrix affinity test showed that Km value, RP value, RB value and RP value were 0.976mM, 1.119mM and 1.119mM, respectively. The solubilization of RP by 0.5% Triton X-100 was studied. Finally, the molecular weight of DDC was estimated by RP filtration method (Sephadex G-100). The molecular weight of DDC was estimated to be about 170,000. E.coli is the most common strain of E.coli. The above results show that the properties of RP and DDC are different.

项目成果

Ryoji Onodera,Toshiharu Shinjo and Makoto Kandatsu: "Formation of lysine from α,ε-diaminopimelic acid contained in rumen bacterial cell walls by rumen ciliate protozoa" Agricultural and Biological Chemistry. 38. 921-926 (1974)

Ryoji Onodera、Toshiharu Shinjo 和 Makoto Kandatsu：“瘤胃纤毛虫原生动物从瘤胃细菌细胞壁中含有的 α,ε-二氨基庚二酸形成赖氨酸”农业和生物化学 38. 921-926 (1974)。

Ryoji Onodera and Makoto Kandatsu: "Formation of lysine from α,ε-diaminopimelic acid and negligible synthesis of lysine from some other precursors by rumen ciliate protozoa" Agricultural and Biological Chemistry. 38. 913-920 (1974)

Ryoji Onodera 和 Makoto Kandatsu：“瘤胃纤毛虫从 α,ε-二氨基庚二酸形成赖氨酸以及从一些其他前体合成可忽略不计的赖氨酸”农业和生物化学 38. 913-920 (1974)。

Ryoji Onodera and Makoto Kandatsu: "Synthesisof lysine from α,ε-diaminopimelic acid by mixed ciliated protozoa" Nature,New Biology. 244. 31-32 (1973)

Ryoji Onodera 和 Makoto Kandatsu：“混合纤毛原生动物从 α,ε-二氨基庚二酸合成赖氨酸”，《自然》，《新生物学》244. 31-32 (1973)。

Ryoji Onodera and Kaoru Koga: "Effect of inhabitation by rumen protozoa on the nutritive value of protein in rumen contents" Agricultural and Biological Chemistry. 51. 1417-1424 (1987)

Ryoji Onodera 和 Kaoru Koga：“瘤胃原生动物的栖息对瘤胃内容物中蛋白质营养价值的影响”农业和生物化学。

神立誠,須藤恒二,小野寺良次 他: "ル-メンの世界-微生物生態と代謝機能-" 農山漁村文化協会, 842 (1985)

Makoto Kandatsu、Kouji Sudo、Ryoji Onodera 等：《管腔的世界 - 微生物生态和代谢功能》农村文化协会，842（1985）