in vitro ^<31>PーNMR分光法を用いた腫瘍細胞株のリン代謝の観察

利用体外^31P-NMR光谱观察肿瘤细胞系中的磷代谢

• 批准号: 01570830
• 负责人: 小島 達自
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 1991
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570830/
• 关键词: 骨軟部腫瘍; 骨肉腫; 培養株; ^<31>PーMIRS; in vitro; リン代謝; 化学療法; 抗癌剤; 培養細胞; ^<31>PーMRS; inーvitro; ^<31>P-MRS

〔材料と方法〕細胞は日本癌細胞・遺伝子銀行(JCRB)のヒト骨肉腫株ltuーO3N1を使用した。大量培養した細胞をラバ-ポリスマンで剥離回収し、日本精密科学製のパイレックスNMR試料管(外径8mm、内径7mm、長さ18cm)内に30分自然沈降させ深さ1.5〜2cmになるように(総細胞数5〜8×10^8個)調整した。更にこの試料管を外径10mm内径9mmの重水を入れた試料管内に重ね挿入した。滅菌したテフロン細管3本を内試料管に入れ、うち最長の1本は細胞に接し培養液注入用とした。灌流用培養液は10%ウシ胎児血清加DM170を用いた。細胞層の上2cmに石英綿フィルタ-をつめ中間長のテフロン細管は液体及び気体回収用、最短の1本からは5%CO_2加O_2を注入し、細胞に接する培養液を灌流しながら ^<31>P=MRSを測定した。NMR装置はVarian400を使用、細胞は37℃に保ち、リンスペクトル周波数161、903MH_2,プロトンデカップリング、受信時間0.4秒、遅延時間0.6秒、の条件で5000〜6000回加算した。〔結果〕クレアチンリン酸PCrのスペクトルは筋組織のそれに比べ極小さい。γー,αー,βーNTPの信号も弱い。無機リン酸P_2の信号は最も強かった。更にアントラサイクリン系の抗癌剤であるピラルービシン(THP)10μg/mlを溶解した培養液で灌流するとスペクトルピ-ク比の変化率はPi/pcrでは-10.6%,PME/pーNTPが+15.6%、Pi/γーNTPが-44.5%、Pi/αーNTPが-43.5%、Pi/βーNTPが-12.5%であった。〔考察〕今までin vivoの骨肉腫の化学療法の各リンスペクトルの変化率はプラス側であったが、今回のin vitroの実験系ではマイナス側となった。その原因としては培養細胞の活性度、細胞だけの組織をまわりに結合織を持った。骨肉腫とのちがい、灌流条件の変化などが考えられる。

[Materials と methods] cells と Japanese cancer cells · Yishin 伝 subsidiary Bank (JCRB) ヒト bone tissue tumor strain ltu <s:1> O3N1を using た た. Mass culture し た cells を ラ バ - ポ リ ス マ ン で peel back 収 し, Japan precision science の パ イ レ ッ ク ス NMR sample tube (8 mm outside diameter, inside diameter 7 mm, long さ 18 cm) に within 30 natural sink さ せ さ 1.5 ~ 2 cm deep に な る よ う に (総 cells number 5 ~ 8 x 10 ^ 8) adjust し た. The に <s:1> <s:1> test tube を has an outer diameter of 10mm and an inner diameter of 9mm. Heavy water を is inserted into the れた test tube, and に heavy ね is inserted into the た. Sterilized たテフロ たテフロ three を thin tubes, the test tube に is filled with れ, the longest うち tube is filled with に, the cells に are connected to the culture medium and injected with と た た. For perfusion, use <s:1> 10%ウシ fetal 児 serum plus DM170を for た た. Cell layer 2 cm on の に Shi Yingmian フ ィ ル タ - を つ め middle の テ フ ロ ン tubule は liquid and び の 収 気 body back, at least 1 this か ら は 5% CO_2 and O_2 を injection し, cell に す を る cultures of perfusion し な が ら ^ < 31 > P = MRS を determination し た. NMR devices は Varian400 を using 37 ℃, cell は に ち, リ ン ス ペ ク ト ル cycle for 161, 903 mh_2, プ ロ ト ン デ カ ッ プ リ ン グ, trusted time of 0.4 seconds, 0.6 seconds between 遅 delay, で の conditions of 5000 ~ 6000 is back to a し た. [Result] <s:1> レアチ リ リ <e:1> acid PCr <s:1> スペ ト ト さ さ the <s:1> tissue <s:1> それに was much smaller than べ さ さ. The γ youdaoplaceholder1,α youdaoplaceholder1,β <s:1> NTP <s:1> signal is <s:1> weak youdaoplaceholder0. The inorganic リ <s:1> acid P_2 <s:1> signal is リ the strongest った った. More に ア ン ト ラ サ イ ク リ ン is の anti-cancer tonic で あ る ピ ラ ル ー ビ シ ン (THP) 10 mu g/ml を dissolved し で た cultures of perfusion す る と ス ペ ク ト ル ピ - ク than の - percent は Pi/PCR で は - 10.6%, PME/p ー NTP が + 15.6%, Pi/gamma ー NTP が - 44.5%, Pi/alpha ー N TPが-43.5%, Pi/β が NTPが-12.5%であった. [investigation] today ま で in vivo の flesh swelling の chemotherapy の each リ ン ス ペ ク ト ル の - percent は プ ラ ス side で あ っ た が の, now back in vitro の be 験 department で は マ イ ナ ス side と な っ た. The reasons for the そ と て て て った the activity of cultured cells, the だけ of cells, the をまわ of tissues, the に of binding tissues, and the を holding of った. Bone and flesh swelling と ちが ちが と, perfusion condition <s:1> variation な <s:1> が examination えられる.

项目成果

Itoh,M.Yoshikawa,K.Higaki,S.Kojima,T.Yagi,K.Suzuki,N and Iio,M.: "Response of Bone and Soft Tissue Sarcomas to Preoperative Chemotherapy Monitored by Pー31・NMR Spectroscopy" Jpn J Nucleara Medicine.

Itoh, M. Yoshikawa, K. Higaki, S. Kojima, T. Yagi, K. Suzuki, N 和 Iio, M.：“通过 P-31・NMR 光谱监测骨和软组织肉瘤对术前化疗的反应”Jpn核医学杂志。

T.Kojima,S.Higaki,T.Iijima,M.Itoh,K.Yoshikawa: " ^<31>PーNMR Spectroscopic changes in preoperative osteosarooma after chemotherapy using 4DFT method" 学会発表Soie^^´te^^´ Internatioal de Chirurgie Orthope^^´dique et de Traumatologie 9ー14Sept.1990#568.

T.Kojima,S.Higaki,T.Iijima,M.Itoh,K.Yoshikawa：“使用 4DFT 方法化疗后术前骨肉瘤的 ^<31>P-NMR 光谱变化”会议演讲 Soie^^´te^^´ 国际de Chirurgie Orthope^^´dique et de Traumatologie 9ー14Sept.1990568。

伊藤 正光: "NMR分光法による腫瘍の放射線治療効果の評価に関する研究" 平成元年度科学研究費補助金研究成果報告書 番号63570486.

伊藤正光：《利用核磁共振波谱法评价肿瘤放射治疗效果的研究》1989年科学研究资助金研究结果报告第63570486号。

Itoh,M.Yoshikawa,K.Higaki,S.Kojima,T.YAGI,K.Suzuki,N.,and Iio,M.: "Response of Bone and Soft Tissue Sarcomas to Pre-operatice Chemotherapy Monitored by P-31 NMR Spectroscopy" Jpn.J.Nuclear Medicine.

Itoh,M.Yoshikawa,K.Higaki,S.Kojima,T.YAGI,K.Suzuki,N.,and Iio,M.：“通过 P-31 NMR 监测骨和软组织肉瘤对术前化疗的反应

小島 達自,飯島 卓夫,檜垣 昇三,伊藤 正光,吉川 宏起: "MRSとMRIによる骨肉腫術前化学療法の効果判定" 日本整形外科学会誌(J.Jpn Crthqp Assoc). 65(6). 5683-5684 (1991)

Tatsuji Kojima、Takuo Iijima、Shozo Higaki、Masamitsu Ito、Hiroki Yoshikawa：“使用 MRS 和 MRI 评估骨肉瘤术前化疗的有效性”日本骨科学会杂志 (J.Jpn Crthqp Assoc) 65(6)。 -5684 (1991)