HL-60株細胞を用いた興奮 分泌連関機構の解明

使用 HL-60 细胞系阐明兴奋性分泌连锁机制

• 批准号: 01580256
• 负责人: 井上 宏子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 1990
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01580256/
• 关键词: HL-60; 分化; カルシウムイオン; イノシト-ルリン脂質

(1)HL-60株細胞はDMSOやレチノ-ル酸などの処理により分化し、各種の刺激に応答するようになることが知られている。そこでまずこれらの分化誘導物質による処理で形態とPI代謝がどのように変化するか調べた。DMSOは1.3%、レチノ-ル酸は0.2μMで4日間処理した。形態は未処理の細胞は丸く表面がなめらかであったが、分化誘導物質処理により形がくずれて表面に突起様のものが認められるようになった。PI代謝は^<32>Pラベルした無機リン酸を細胞内に取り込ませることによって分析した。その結果DMSO処理によりイノシト-ルリン脂質、特にPIへの^<32>Pの取り込みが低下した。このことはPI代謝酵素、特にPAからPIを生成する酵素の活性の低下を示している。PIP_2の定量を抗体で行う方法は現在検討しているところである。(2)分化させたHL-60細胞をfMLPで刺激した場合の細胞内のCa濃度の変化とチャンネルの開閉の測定を行った。Ca濃度の測定はCa指示薬fura-2を5μM取り込ませ、顕微測光システムによって行った。その結果刺激直後に急激なCa濃度の上昇が見られ、一度元に戻ってから緩やかな上昇をするという二相性を示した。チャンネルの開閉はホ-ルセラルクランプ法で行った。fMLP投与後内向き電流が観測されたが、これはCa電流と考えられるので、Ca濃度上昇との関連を今後調べる。これらの実験の過程で分化誘導物質で処理する前の細胞においても、fMLPで応答がみられる場合があった。これは細胞の培養液に用いる血清に分化誘導物質が含まれる可能性も考えられるので検討している。

(1)HL-60 cells differentiated and responded to various stimuli in response to DMSO treatment. The differentiation inducing substance is processed in the form of PI and metabolized in the form of PI. DMSO was 1.3%, The morphology of the untreated cells is different from that of the untreated cells. PI metabolism is the result of intracellular analysis of inorganic acids<32>. As a result, DMSO treatment resulted in a decrease in lipid and PI concentrations<32>. This indicates that the activity of PI metabolizing enzymes, especially PA, is low. The method of quantitative determination of PIP_2 antibody is discussed. (2)Changes in intracellular Ca concentration and cell growth in HL-60 cells stimulated by fMLP were measured. Ca concentration determination: Ca indicator fura-2 &lt;5μM As a result, the rapid increase of Ca concentration after stimulation was observed, and the gradual increase of Ca concentration after stimulation was observed. Open and close the ring. FMLP is associated with inward current measurement, Ca current measurement, Ca concentration increase, and subsequent modulation. In the process of differentiation, the differentiation inducing substance is processed before the cell is processed, and the fMLP is processed. The possibility of differentiation inducing substances in serum used in cell culture medium was examined.