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がん遺伝子とがん抑制遺伝子の相互作用による発がんの分子機構

癌基因与抑癌基因相互作用致癌的分子机制

基本信息

批准号：
02151055
负责人：
藤永〓
金额：
$ 9.34万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞性がん抑制遺伝子RBやp53の遺伝子産物とDNA型がんウイルスのがん遺伝子産物とが蛋白・蛋白複合体を形成することが見出され,このことが細胞のがん化に重要な役割を果していることが変異導入実験などを用いて明らかになりつつある。本研究では,前述の複合体形成の確認と複合体形成に必須な構造の解析,がん遺伝子産物と結合する未知細胞性蛋白の解析,がん抑制遺伝子の正常細胞における機能,複合体形成による機能変化を探るものである。初年度である平成二年度は遺伝子産物の量産,抗体の作成など実験材料の確保や実験系の確立など実験環境の整備に重点をおいた。主な結果を次に述べる。1.従来困難であったRBやパピロ-マウイルスE7遺伝子産物の量産が,それぞれ,バキュロウイルスベクタ-系およびEーcoli系を用いて可能となり,蛋白の精製,抗体の作成が進行中である。2.RBは,細胞周期によりその燐酸化レベルが変化することが知られているが,HL60細胞の分化に伴いRB燐酸化レベルが低下することが判明した。これはphosphataseの活性化ではなく,kinase反応の低下と考えられる。3.RBの燐酸化はcdcー2キナ-ゼ,MAPキナ-ゼでおこる。細胞内における燐酸化も両者が主役と考えられるが,免疫共沈法を用いて検討中である。4.パピロ-マウイルス(HPV)E7遺伝子産物はRBとE6遺伝子産物はp53と複合体を形成する。HPV16型とHPV526型について,複合体形成とトランスフォ-ム活性との関連検討が型間の比較,変異導入実験によって開始された。5.口腔扁平上皮がん細胞株18株すべてにp53遺伝子の構造異常かあるいはp53の発現異常が認められた。これらの変異がDNA型がんウイルスがん遺伝子産物との複合体形成能やトランスフォ-能とどのように関連しているのかは今後の問題である。

Cellular gene inhibitor RB p53 gene product DNA type gene product protein protein complex formation is found in the cell, which is important for cell transformation. This study aims to confirm the formation of these complexes, analyze the structures necessary for complex formation, analyze the unknown cellular proteins associated with gene products, inhibit the normal cellular functions of gene products, and explore the functional changes during complex formation. In the first two years of the year, the mass production of the carrier product, the production of the antibody, the establishment of the material, and the preparation of the environment were emphasized. The main result is the secondary result. 1. It is difficult to produce E7 gene products in large quantities. It is possible to purify proteins and prepare antibodies in E coli systems. 2. RB phosphorylation was decreased in HL60 cells during differentiation. The activity of phosphatase is low, and the kinase activity is low. 3. RB phosphorylation cdc <$2-,MAP. In the cell, the phosphorylation is mainly used in the study, and the immunoprecipitation method is used in the study. 4. HPV E7 gene product RB and E6 gene product p53 complex formation. HPV type 16 and HPV type 526 are closely related to each other, and complex formation, activity, and association are discussed. 5. The structural abnormality of p53 gene in 18 oral squamous epithelial cell lines was identified. The DNA type is different, the gene product is different, the complex formation is different, the energy is different, the relationship is different, the problem is different.