イモリにおけるレンズの再生を虹彩上縁部に限定する分子の解析

限制蝾螈晶状体再生至虹膜上缘的分子分析

• 批准号: 02640573
• 负责人: 阿形 清和
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02640573/
• 关键词: イモリ; 再生; レンズ; 色素上皮; モノクロ-ナル抗体; 糖タンパク質

(1)2NIー36抗原が認識する抗原の精製:これまでに、この抗原分子はウエスタンブロットによって80kD以上の不溶性タンパク質として検出されていたが、その生化学的実体は不明瞭のままであった。そこで、我々はイモリからこの抗原分子を精製し生化学的性質を明らかにすることを計画した。現在、以下に示すような精製方法を確立し、この抗原分子の生化学的性質を解析中である。我々の確立した精製方法は(1)イモリから不溶性膜分画を調整した後、TritonXー100によって抗原分子を可溶化する。(2)可溶化された抗原分子をDEAEーSepharose chromatography及びRCA120Ag arose chromatographyにかける。(3)2NIー36抗原を固定化したSepharose chromatographyにかける。(4)透析後、TritonXー100を除去する。(5)超遠心後沈澱した抗原分子を50%アセトニトリルで可溶化した後、粉末化する。この方法で抗原分子をほぼ精製できたと思われる。この精製標品のウエスタンブロットにより、この抗原分子は分子量80kD、100kD、120kD、180kDの大きさをもつ大溶性糖タンパク質であることが明かとなった。(2)抗原分子の遺伝子のクロ-ニング:精製標品を用いて作成したポリクロ-ナル抗体を使用して、λgt11発現ベクタ-で作製したイモリcDNAライブラリ-をスクリ-ニングしたところ、3個のポジティブクロ-ンが得られた。現在各クロ-ンの塩基配列決定の作業が進行中である。(3)生体内分布と正常発生における発現時期の解析:免疫組織化学的手法を用いてこの抗原分子の生体内分布を調べたところ、この抗原分子は色素上皮細胞特異的ではなく真皮、血管、中腎など各組織を広く分布していることが判明した。また、同様な手法を用いて発生段階における発現時期を調べた結果、眼球内では色素上皮細胞の分化に伴って初めて発現することも明かとなった。そのほか血管の形成とともに発現することもわかった。

(1) 2NI 36 antigens, antigens, molecules, molecules, molecules, We need to know about the nature of biochemistry and the nature of antigen molecules. Now, the following shows that the methods of identification and biochemical analysis of antigenic molecules are in the process of analysis. We made sure that the method (1) made sure that the insoluble membrane was separated and cleaned up, and that the antigen molecules were soluble in TritonX 100%. (2) soluble DEAE antigens Sepharose chromatography and RCA120Ag arose chromatography antigens. (3) 2NI "36 antigen" immobilized "Sepharose chromatography" antigen. (4) after dialysis, TritonX 100ml to remove trophoblastoma. (5) 50% of the antigenic molecules were dissolved and then powdered. The antigen molecule was used to detect the antigenic molecule. The molecular weight of 80kD, 100kD, 120kD, 180kD, soluble sugar, soluble sugar, molecular weight, molecular weight and molecular weight. (2) Antigen molecular antigens, antibodies, antibodies, At present, the allocation of each database determines that the operation is in progress. (3) current phase analysis of the distribution of normal mice in vivo: immunocytochemistry was used to determine the distribution of antigens in the tissues of the dermis, blood vessels and mesenteric tissues by means of immunocytochemistry. The results of the current phase and the differentiation of the pigment epithelium cells in the eyeball were analyzed by using the same method and the results of the current phase of the experiment. The blood vessels are formed and the blood vessels are formed.