副甲状腺ホルモン受容体の同定に関する研究

甲状旁腺激素受体的鉴定研究

• 批准号: 02671094
• 负责人: 滋野 長平
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02671094/
• 关键词: 副甲状腺ホルモン; 受容体; 発現クロ-ニング; ^<111>In

平成二年度に於て、我々は[dCys^<35>]ラットPTHー(1ー35)NH_2(CysPTH)を合成した。次にDTPAmoietyをスペ-サ-を介して共有結合的にCysPTHに導入した(DPTH)。DPTHのligand probeとしてのeligibilityを検討し、これを ^<111>Inにより標識し、 ^<111>InーDPTHがPTHRをコ-ドするcDNAの発現クロ-ニングにおけるligand probeとして相応しい諸性質をもつことを明らかにした。平成3年度において、PTHRをコ-ドするcDNAの発現クロ-ニングを試みた。PTHRを多量に発現しているマウス由来ATDC細胞およびウサギ静止軟骨初代培養細胞よりcDNA libraryを作成し、それぞれ、pCDNA1を発現ベクタ-として組み込み、DEAEーdextran法によりCOSー1細胞に導入した。PTHRを発現する細胞は、 ^<111>InーDPTHの結合能を指標として以下のごとく検出を試みた。プラスティクプレ-ト上でCOSー1細胞を ^<111>InーDPTHと結合させたのちautoradiographyを行ない、PTHRを発現している細胞をスクリ-ニングした。positive signalを有するCOS細胞よりplasmid DNAを回収し、electroporationによりE.coliに導入してplasmid DNAを調製した。この方法を繰り返すことにより、PTHRをencodeするcDNA clone poolのenrichmentを試みた。本法を種々のパラメ-タを変更しながら25回試みたが、非特異的信号を除外するに到らず、単一なクロ-ンを得ることはできなかった。平成3年8月、米国ハ-バ-ド大学のSegreらのグル-プが、我々とほぼ同一の方法によるPTHRのクロ-ニングに成功した。

In the second year of Heisei, <35>I was able to synthesize PTH (1 - 35)NH_2(CysPTH). The second is the introduction of CysPTH. DPTH's ligand probe and its eligibility are discussed <111>in <111>detail. In this paper, the characteristics of DPTH's ligand probe and its PTHR cDNA are discussed. In the third year of Heisei, PTHR cDNA was generated and tested. PTHR was developed in large quantities from ATDC cells and from resting cartilage primary culture cells. cDNA library was prepared and pCDNA1 was developed by DEAE dextran method and introduced into COS 1 cells. PTHR appears in the <111>cell, and In the DPTH binding energy index below. The COS-1 cell is located In the center of <111>the DPTH junction, and the PTHR is located in the center of the COS-1 cell. The positive signal was transmitted to COS cells, and the plasmid DNA was transferred to E.coli cells. The method of encoding cDNA clone pool This method is based on a 25-loop test, except for non-specific signals. August, 2003, U.S. Segret University, U.S. PTHR, U.S. PTHR, U.S.