ヒト腎細胞癌由来骨吸収促進因子の精製,同定及びその遺伝子クローニング

人肾细胞癌骨吸收促进因子的纯化、鉴定及基因克隆

• 批准号: 04671473
• 负责人: 滋野 長平
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 1993
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04671473/
• 关键词: 骨吸収; 破骨細胞; ヒト腎細胞癌; 遺伝子クローニング; 蛋白精製

平成五年度では昨年度に引き続いてRCC-K1の無血清培養上清を出発材料としてRCC-OTFの各種クロマトグラフィーでの挙動、活性の安定性を検討した。試料中の骨吸収活性はCa-45で生体標識された新生児マウス頭蓋骨を用いた器官培養系により検出した。この過程で、RCC-K1の産生するRCC-OTFの比活性がロットにより大きく変動するようになった。この原因を解明する作業の中でRCC-K1のすべてのロットがマイコプラズマに汚染されていることが判明した。そこで、抗マイコプラズマ剤(MC-210)処理をおこなったところ、マイコプラズマが除染されたRCC-K1からはRCC-OTF産生が検出できなくなった。この現象は、培地の種類(AlphaMEM,DMEM/HAM F12,HAM F12,DMEM)によらず、培地に添加する牛胎児血清の濃度やロットとは無関係であり、また、細胞の稠密度とも関係しなかった。一般にマイコプラズマに汚染された細胞では各種のサイトカインの産生が影響を受けることが知られており、マイコプラズマに汚染されたRCC-K1からのRCC-OTFの産生もマイコプラズマ汚染によって何らかの調節を受けている可能性がある。あるいは、RCC-OTFがマイコプラズマの遺伝子産物である可能性も否定できない。現在、複数のマイコプラズマ除染剤をもちいて、除染されたRCC-K1からのRCC-OTF産生のための条件を再検討中である。

1993年，从去年开始，我们使用RCC-K1的无血清培养上清液作为起始材料研究了RCC-OTF在各种色谱中的行为和稳定性。使用具有CA-45标记的新生小鼠头骨通过器官培养系统检测样品中的骨吸收活性。在此过程中，RCC-K1产生的RCC-OTF的特定活性大大波动，具体取决于批次。在确定其原因的工作中，发现所有RCC-K1都被支原体污染。因此，当治疗抗肌营养剂（MC-210）时，不再从已通过支原体污染的RCC-K1中检测到RCC-OTF产生。这种现象与添加到培养基中的浓度或大量胎牛血清无关，无论培养基的类型（Alphamem，DMEM/HAM F12，HAM F12，DMEM）与细胞密度无关。众所周知，各种细胞因子的产生受到细胞膜污染的细胞的影响，并且可能还可能通过支原体污染对富含支原体污染的RCC-K1产生RCC-OTF。另外，不能排除RCC-OTF可能是支原体的基因产物。当前，正在重新审查从污染的RCC-K1产生RCC-K1的RCC-OTF条件。