大気汚染疫学と動物曝露実験の整合性に関する研究

空气污染流行病学与动物暴露实验一致性研究

• 批准号: 03404027
• 负责人: 魚住 光郎
• 金额: $ 7.55万
• 依托单位: Osaka Prefectural Institute of Public Health
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (A)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 1994
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03404027/
• 关键词: 窒素酸化物曝露; 気管洗浄液; ビオチン化レクチン; コンAアガロース; インゲンマメレクチンE4; コンAアガローズ; 大気汚染; 二酸化窒素曝露実験; 粒子曝露実験

これまでに窒素酸化物曝露ラットの気管洗浄液中の蛋白質を一次元および二次元ゲル電気泳動により分析し、窒素酸化物曝露にともなって増加する複数の蛋白質の存在を明らかにした。その中で分子量48キロダルトン、等電点約4.0の糖蛋白質に焦点を合わせてその精製を試みた。目的蛋白質が糖蛋白質であることが予想されたので、ビオチン化レクチンをプローブとして目的蛋白質に反応するレクチンの検索を行った結果、コンカナバリンA、インゲンマメレクチンE4、およびヒママメレクチンIが特異的に目的蛋白質に結合することが判明した。そこで、コンカナバリンAをアガロースビーズに固定したカラムを用いて精製を試みた。窒素酸化物曝露ラット気管洗浄液をこのカラムに重層し、よく洗浄した後、0.2モルのメチルα-Dグルコシドにより溶出したところ、溶出画分に目的蛋白質と同一の分子量を持つ蛋白質を検出することができたが、この画分にも目的蛋白質以外の蛋白質が混入していた。これはレクチンブロッティングの結果と良く一致していた。目的蛋白質をコンカナバリンA結合画分よりさらに精製する目的で、インゲンマメレクチンE4をアガロースビーズに固定したものをカラムに充填したものを用いた。予備実験として少量のコンカナバリンA結合画分をこのカラムに重層し、よく洗浄した後、0.2モルのほう酸カリウムにより溶出したところ、少量の蛋白質が溶出された。スケールアップして同様な実験を行い、目的蛋白質の精製を試みたが十分量の蛋白質を得るには到らなかった。結論としては、精製蛋白質のアミノ末端よりアミノ酸配列を決定し、これを元にして、(1)合成ペプチッドを作成するか、あるいは(2)アミノ酸配列をもとにして蛋白質のcDNAをクローニングしリコンビナント蛋白質を構築し、これらにより免疫することによって、モノクローナル抗体を作成することが妥当であることが判った。

これまでに火簗気簗簗気簗 Pipe cleaning solution のprotein を一元 および二元 ゲルelectrophoresis The analysis of animal and acid compounds, the exposure of phytochemicals, and the presence of proteins in the protein are as follows. It is a glycoprotein with a molecular weight of 48 キロダルトン and an isoelectric point of about 4.0. Target protein がglycoprotein であることが yu want されたので、ビオチン化レクチンをプローブとしてObject protein に Reflection するレクチンの検SO を行ったRESULT, コンカナバリンA, インゲンマメレクチンE4, およびヒThe binding of the specific protein of the ママメレクチンIがににることが was revealed.そこで, コンカナバリンAをアガロースビーズにfixed したカラムをwith いて refined をtrialみた. Asphyxiated acid compound exposed ラット気 tube cleaning liquid をこのカラムに heavy layer し, よく cleanした后、0.2モルのメチルα-Dグルコシドによりsoluble したところ, Dissolution is divided into proteins of the same molecular weight and proteins of the same molecular weight.これはレクチンブロッティングのRESULTSと好く unanimousしていた. Target protein をコンカナバリンA combined with よりさらにpurified するpurposeで, インゲンマメレクチンE4をアガロースビーズにfixed したものをカラムにfilled したものを用いた. Prepare a small amount of のコンカナバリンA combined with the drawing points をこのカラムに Heavy layer し, よく washed したAfter that, 0.2 モルのほう acid カリウムにより is dissolved and a small amount of protein is dissolved. The purpose of protein purification is as follows: Conclusion としては、Refined protein のアミノTerminal よりアミノacid arrangement をdeterminationし、これを元にして, (1) Synthetic ペプチッドを成するか, あるいは (2) アミノ acid preparation をもとにして egg White matter cDNA cDNA protein structure, immunityすることによって、モノクローナルantibodiesをmadeすることがappropriateであることがadjustedった.