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巨核球系分化に特異的なチロシンキナーゼ活性の解析

巨核细胞分化特异性酪氨酸激酶活性分析

基本信息

批准号：
03670165
负责人：
丹下剛
金额：
$ 0.38万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至 1992
项目状态：
已结题

项目摘要

巨核球系分化の分子生物学的アプローチとしてc-yes癌遺伝子蛋白のチロシンキナーゼ活性(TPK活性)のdown regulationが巨核球系分化に特異的であることを証明するのが本実験の目的である。昨年度の反省からこの目的にかなった細胞を得ることに主眼をおいた。1)T-33細胞株の分化度が低下したので、クローニングによってPPO陽性率が高いクローンを得た。T-33-17を使って、最近注目されてきた巨核球系分化に関与する各種リコンビナント造血因子とTPA処理によって分化誘導をおこなった。この結果、T-33-17のGPIIbIIIaの陽性率は対照群の10%以下に比してTPA処理で50%に達し、造血因子(IL-6など)添加で50-100%に、造血因子+TPA添加群で100%に達した。2)ついで、ラット骨髄より巨核球を免疫ビーズ法で精製分離し、血小板産生能に対する各種造血因子の影響をproplatelet formation(PPF)アッセイで検討した。このPPFアッセイではT-33細胞株と異なり、巨核球系分化の終末期に対するトロンボポエチン活性を検出できる。その結果、添加後2日目にIL-6とEPoに強いPPF活性を認めた。両者に強い相乗効果を認めた。従って、T-33-17の分化誘導後のccll lysateおよび、IL-6,EPoを添加後一日目の巨核球を回収してこのcell lysateに関してc-yes癌遺伝子蛋白のTPKアッセイを開始したが、結論を出すにいたっていない。

Molecular Biology of Megakaryocyte Differentiation and the down activity of the oncogene c-yes oncogenic protein (TPK activity) Regulation and megakaryocytic differentiation are specific and proven. Reflection on last year's purpose is the purpose of the cell. 1) The differentiation degree of T-33 cell line is low, and the PPO positive rate of クローニングによって is high. T-33-17 is used to induce differentiation of megakaryoblasts and various hematopoietic factors such as TPA treatment. As a result, the positive rate of T-33-17 GPIIbIIIa was less than 10% in the group, which was higher than 50% in TPA treatment. It contains 50-100% of hematopoietic factor (IL-6) and 100% of hematopoietic factor + TPA. 2) ついで, ラットbone 髄より Megakaryon をimmuno-ビーズ method で refined separation し, platelet production ability に対するThe influence of various hematopoietic factors をproplatelet formation(PPF)アッセイで検多した.このPPF アッセイではT-33 cell line とdifferent なり, megakaryocytic differentiation of the terminal stage に対するトロンボポエチン active を検出できる. As a result, the strong PPF activity of IL-6 and EPo was confirmed 2 days after addition. The multiplication effect of the two is strong and the multiplication effect is the same.従って、T-33-17のccll lysateおよび after differentiation induction、IL-6、EPoをAfter addition, it is a day to recover the meganuclear ball してこのcell lysate に关してc-yes oncogenic protein のTPK アッセイをstart したが, conclusion を出すにいたっていない.