溶血性連鎖球菌の菌体表面上に存在するM蛋白の抗食作用の分子遺伝子学的解析

溶血性链球菌细胞表面M蛋白抗吞噬活性的分子遗传学分析

基本信息

  • 批准号:
    03670210
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.9万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1991
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1991 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

目的;Streptococcus pyogenesは菌体表層上のM蛋白の抗原性の相違により80種類以上に別れるが、M蛋白をもつ菌は多核白血球の貧食に低抗性を示すことからM蛋白が重要なビルレンス因子と考えられている。我々は、SSPーPCR(Single Specific Primer Polymerase Cham Reaction)法を用いてC203株からemm3遺伝子のクロ-ニングを試みた。方法;Mb構造遺伝子を含んだpJRS42.50(Dr.June R、Scottより供与)から大部分のM6遺伝子を保有したMspI/PvuII fragmentを得、精製した。S.pyogenes C203株由来の遺伝子は菌体をSDSで溶かし、proteinase K.CTAB(hexadecyl trimetyl ammonium bromicle)を用いて蛋白,polysaccharideなどを除き,DNAをisopropanol沈殿により回収した。M6遺伝子由来のMspI/PvuII fragmentをDigoxigennで標識し、hybridizationを行った。SSPーPCR法はPrimer1としてM遺伝子のleader seguence中の保存領域のorigonucreotide(5'>TCG CTT AGA AAA TTA AAA ACA GGA ACG>3')とprimer RV(pumer G)のvectorに相補的なorigonucreotideを用いての増幅を行った。結果と考察;Digoxigenin標識MspI/PvuII fragmentを用いてC203株のEcoRl処理DNAとDotーblot hybridizationを行ってみると,positive spotが検出された。更にSSPーPCR法を用いて約1KbのDNAを中心として5ー6本のDNAを増幅させた標品をDigoxigenin標識MspI/pvuII fragmentを用いてDotーblotを行なって見るとpositive spotが検出され、又、Agarose電気泳動後、Southerm blot hybridizationを行って見ると約1kbのDNAとhybridigeした。この約1kbのDNAがemm3遺伝子由来のものと考えられ、このDNAを精製し、更に現在このDNAのsubcloningを試みている。
Objective: To investigate the antigenicity of M protein on the surface of Streptococcus pyogenes, and to identify more than 80 species of M protein, and to demonstrate the low resistance of M protein to oligophagy of polynuclear leukocytes. The PCR(Single Specific Primer Polymerase Cham Reaction) method was used to detect C203 strain C203 gene. Methods: Mb structural fragments containing pJRS42.50(Dr. June R, Scott R) were obtained and refined from most of the M6 fragments. S.pyogenes C203 strain was isolated by SDS, protease K.CTAB(hexadecyl trimethyl ammonium bromide) and DNA isopropanol. The MspI/PvuII fragment of M6 gene is identified and hybridized. SSP PCR method increases the amplitude of Primer1 and primer 1 vector vector Results: Digoxigenin marker MspI/PvuII fragment was detected by DNA dot blot hybridization of EcoRl strain C203. In addition, SSP PCR method was used to detect about 1 kb of DNA in the center, 5 kb of DNA in the center, 5 kb of DNA in the center, and 5 kb of DNA in the center. About 1kb of this DNA is emm3 gene. The origin, purification and cloning of this DNA are discussed.

项目成果

期刊论文数量(7)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Pramoonjago,P.: "Bactericidal activity of C9ーdeficient human serum." J.Immunol.148. (1992)
Pramoonjago, P.:“C9 缺陷的人血清的杀菌活性。J.Immunol.148(1992)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Tanaka,E.: "Murine monoclonal antiーBa antibody that enhances haemolytic activity of factor B." Immunology. 73. 383-387 (1991)
Tanaka, E.:“增强 B 因子溶血活性的鼠单克隆抗 Ba 抗体。”免疫学。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Hong,K.: "Binding ability of complement receptor CR1 to C3 bound on the surface of M+group a streptococci."
Hong,K.:“补体受体 CR1 与 M 组 a 链球菌表面结合的 C3 的结合能力。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Pramoonjago,P.: "Role of Tra T protein,an anticomplempentary protein produced in Escherichia coli by R100 factor,in serum resistance." J.Immunol.148. (1992)
Pramoonjago,P.:“Tra T 蛋白(一种由 R100 因子在大肠杆菌中产生的抗补体蛋白)在血清抵抗中的作用。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
洪 卿秀: "補体系の蛋白質集合体ーC5転換酵素の4次構造ー" ライフサイエンス出版, 3 (1991)
洪庆洙:“补体系统的蛋白质组装 - C5转化酶的四级结构”生命科学出版社,3(1991)
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
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    0
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    $ 0.9万
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