複製欠陥ヘルペスウイルスをベクタ-に用いたヒトHPRT遺伝子の神経細胞への導入

使用复制缺陷型疱疹病毒作为载体将人类 HPRT 基因引入神经细胞

• 批准号: 03671166
• 负责人: 日高 雄二
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03671166/
• 关键词: 遺伝子移入; HPRT; ヘルペスウイルス

この研究テ-マの目的はヒトのヒポキサンチグアニンフォスフォリボシルトランスフェラ-ゼ(HPRT)遺伝子をHPRT欠損培養細胞に導入することである。その際、ベクタ-としてヘルペスシンプレックスウイルス1型の変異株(宿主細胞内で感染性のウイルスを複製できない)を用いることにより、ヘルペスウイルスの病原性のために細胞が損傷されないようにHPRTの活性を回復させる。研究代表者はpBR322にウイルスのチミジンキナ-ゼ遺伝子を含むDNA断片をもつプラスミッドpX1のチミジンキナ-ゼ遺伝子の上流に、ヒトHPRTプロモ-タ-、ヒトHPRT遺伝子を組み込んだプラスミッドと、ヒトHPRTプロモ-タ-の代わりにヘルペスウイルスのチミジンキナ-ゼプロモ-タ-をもつプラスミッドを作成した。さらに発現のインジケ-タ-とするためにヒとHPRT遺伝子の代わりに代腸菌ガラクトシダ-ゼ遺伝子を組み込んだプラスミッドも作成した。その3種類のプラスミッドをそれぞれn504株のD と混合して単層V27細胞にトランスフェクトさせていわゆるホモロガスリコンビネ-ションによって組換えウイルスをつくり、サザンブロットにてヒトHPRT遺伝子あるいは大腸菌ガラクトシダ-ゼ遺伝子をもつウイルスプラ-クを選択した。ウイルスの精製過程においては3種類の非感染性組換えウイルスは比較的安定であることがわかった。現在Vero細胞と培養神経細胞株4Cにおける発現を調べている。

こ の research テ - マ の purpose は ヒ ト の ヒ ポ キ サ ン チ グ ア ニ ン フ ォ ス フ ォ リ ボ シ ル ト ラ ン ス フ ェ ラ - ゼ (HPRT) heritage 伝 son を HPRT owe damage of cultured cells に import す る こ と で あ る. そ の interstate, ベ ク タ - と し て ヘ ル ペ ス シ ン プ レ ッ ク ス ウ イ ル ス の type 1 - different strains (within the host cell で infectious の ウ イ ル ス を copy で き な い) を with い る こ と に よ り, ヘ ル ペ ス ウ イ ル ス の pathogenicity の た め が に cell damage さ れ な い よ う に HPRT の active reply を さ せ る. Research representatives は pBR322 に ウ イ ル ス の チ ミ ジ ン キ ナ - ゼ heritage 伝 son を containing む DNA fragment を も つ プ ラ ス ミ ッ ド pX1 の チ ミ ジ ン キ ナ - ゼ heritage 伝 の high-class に, ヒ ト HPRT プ ロ モ タ -, ヒ ト HPRT heritage 伝 son を group み 込 ん だ プ ラ ス ミ ッ ド と, ヒ ト HPRT プ ロ モ タ - の generation わ り に ヘ ル ペ ス ウ イ ル ス の チ ミ ジ ン キ ナ - ゼ プ ロ モ タ - を も つ プ ラ ス ミ ッ ド を made し た. さ ら に 発 is の イ ン ジ ケ タ - と す る た め に ヒ と HPRT heritage 伝 の わ generation り に generation of intestinal bacteria ガ ラ ク ト シ ダ - ゼ posthumous son 伝 を group み 込 ん だ プ ラ ス ミ ッ ド も made し た. Youdaoplaceholder0 そ 3 species プラス プラス ッドをそれぞれn504 strain <s:1> D V27 と mixed し て 単 layer cells に ト ラ ン ス フ ェ ク ト さ せ て い わ ゆ る ホ モ ロ ガ ス リ コ ン ビ ネ - シ ョ ン に よ っ て group in え ウ イ ル ス を つ く り, サ ザ ン ブ ロ ッ ト に て ヒ ト HPRT heritage 伝 son あ る い は coliform ガ ラ ク ト シ ダ - ゼ heritage 伝 son を も つ ウ イ ル ス プ ラ ク - を sentaku し た. ウ イ ル ス の refining process に お い て は 3 kinds の noninfectious group in え ウ イ ル ス は relative stability で あ る こ と が わ か っ た. Now Vero cells と cultured Shinto cell line 4Cにおける shows を regulation べて る る る.

项目成果

日高 雄二: "HPRT遺伝子移入" 帝京医学雑誌. 15. No.5 (1992)

Yuji Hidaka：“HPRT 基因转移”帝京医学杂志 15. No.5 (1992)。