タウリン資化性海洋細菌の酵素を用いるタウリン定量法の開発

利用牛磺酸同化海洋细菌酶开发牛磺酸定量方法

• 批准号: 05556035
• 负责人: 永山 文男
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: 東京水産大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05556035/
• 关键词: タウリン; 酵素的分析; 海洋細菌; ビブリオ; 脱水素酵素; センサー

本研究では酵素的にタウリンを定量する方法を確立するために、タウリン資化性細菌のタウリン脱水素酵素の酵素学的性質を明らかにし分析システムの基礎的な資料を提供しようとするものである。「方法」(1)ハマグリからタウリン資化性細菌を分離し、同定した。(2)種々の培養条件について検討した。(3)菌体から酵素を抽出し、塩析、Sepharose CL6B、DEAE-Toyopearl 650M、Toyopearl HW55カラムクロマトグラフイーによりタウリン脱水素酵素を部分精製した。(4)得られた酵素について酵素化学的諸性状を調べた。(5)閉鎖反応系での酵素電極によるタウリン分析法について検討した。(6)酵素をろ紙に吸着固定し、酸素電極に組み込み連続反応系によるタウリンの測定条件を検討し、検量線を作成した。「結果」(1)ハマグリから得られたタウリン資化性細菌のうち、最も酵素生産性の高い菌はVibrio natriegensであった。(2)温度30℃、pH7.0、タウリンの濃度1%、NaClの濃度2.5%が至適培養条件であった。(3)タウリン脱水素酵素の至適温度は25〜30℃、至適pHは8.5、分子量は非常に大きく、多量体ではないかと考えられる。40℃-60分加熱で50%活性が低下した。タウリンに対するKmは6.26×10^<-2>mol/lで、補酵素PMSに対するKmは6.53×10^<-4>mol/lであった。本酵素はCa^<2+>によって活性が促進され、それに対して、PCMB,glutathione disulfide,EDTA,Cu^<2+>,Zn^<2+>,Ag^+によって阻害された。DTTのような還元剤は安定性を増大させる。(4)固定化酵素によるタウリンの測定条件についてみると、温度25℃、pH8.5〜9.0、緩衝液の流速0.3ml/min、試料20μlを用いる場合の測定の範囲は2x10^<-8>〜8x10^<-7> molであった。

In this study, the quantitative method of enzyme analysis was used to determine the characteristics of dehydrase, dehydrase and enzyme. "methods" (1) to determine the same level of bacterial isolation and identification of information-based bacteria. (2) A variety of training conditions are required to provide training. (3) extraction, analysis, Sepharose CL6B, DEAE-Toyopearl 650m, Toyopearl HW55 enzyme extraction and partial purification of dehydrase. (4) to obtain the characteristics of enzyme chemistry. (5) the enzyme electrophoretic assay was used to analyze the enzyme activity. (6) enzyme immobilization and acid electrodes are used to determine the conditions for the determination of the temperature. "results" (1) the results showed that the highest enzyme-producing bacteria were Vibrio natriegens-producing bacteria, and the highest enzyme-producing bacteria were the highest. (2) the temperature is 30 ℃, pH7.0, the temperature is 1% and the NaCl temperature is 2.5%. (3) the temperature of dehydrase is 25 ℃ 30 ℃, the pH value is 8.5, the molecular weight is very large, and the multi-body weight is very high. 40 ℃-60 minutes plus 50% low activity. Km 6.26 × 10 ^ & lt;-2>mol/l, enzyme PMS Km 6.53 × 10 ^ & lt;-4>mol/l. This enzyme, Ca ^ & lt;2+> zinc, promotes the activity of zinc chloride, PCMB,glutathione disulfide,EDTA, cu ^ & lt;2+>, Zn ^ & lt;2+>, AG ^ + enzyme blocks the damage of zinc. DTT, stability, stability and stability. (4) the conditions for the determination of immobilized enzyme were as follows: temperature 25 ℃, pH8.5~9.0, temperature 25 ℃, flow rate 0.3ml/min, determination range 2x10 ^ & lt;-8>~ 8x10 ^ & lt;-7> mol temperature 20 μ l.