家蚕中腸上皮細胞上のdelta-エンドトキシン受容体に対するモノクローナル抗体作製

家蚕中肠上皮细胞δ内毒素受体单克隆抗体的制备

• 批准号: 05856008
• 负责人: 浅野 真一郎
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05856008/
• 关键词: Bacillus thuringiensis; delta-エンドトキシン; BBMV; バインディングアッセイ; ウエスタンブロット

家蚕中腸上皮細胞上に存在する、Bacillus thuringiensis subsp.sottoのdelta-エンドトキシンにたいする受容体についてまず解析を進めた。まず家蚕中腸の組織切片を作成し、切片上にてdelta-エンドトキシンとのバインディングアッセイを行ったところ、家蚕中腸上皮細胞にdelta-エンドトキシンに強い親和性を持つ受容体が存在していることが明らかとなった。Wolfersbergerらの方法に従い、Mg/EDTA沈殿と分画遠心法によって調整した家蚕中腸からBrush border membrane vesicle(BBMV)を調整し、SDS-P AGEによる分画の後、ウエスタンブロットしsotto由来のdelta-エンドトキシンとのバインディングアッセイによる解析によって、BBMV由来の幾つかの分画のバンドとバインディングが認められた。その中でも役130kdalのバンドに強いバインディングが認められたので、そのバンドの分画をSDS-ポリカクリルアミドゲルから切り出して電気泳動的にその分画のペプチドを回収した。その回収した分画のペプチドとdelta-エンドトキシンとをco-incubateし十分にそのペプチドとdelta-エンドトキシンとバインディングさせた後、ウェスタンブロットしたBBMV分画とのバインディングアッセイを行ったところ、バインディングが押さえられていることが明らかとなった。よって、家蚕中腸BBMVをSDS-PAGEによって分画して、ゲルから回収し、その回収した分画をマウスに皮下接種して現在免疫化している。それによって得られた抗体を用いて、家蚕BBMVとsotto由来のdelta-エンドトキシンとのバインディングを阻害することができるかを確かめるつもりである。

On the epithelial cells of the midgut of silkworms, there are する and Bacillus thuringiensis subsp.sotto のdelta-エンドトキシンにたいする receptor についてまずanalytic を入めた. The silkworm midgut tissue slices are made, and the slices are made of にてdelta-エンドトキシンとのバインディングアッセイを行ったところ, Bombyx mori midgut epithelial cells have strong affinity and strong affinity for the epithelial cells of the silkworm midgut. Wolfersberger らの method に従い, Mg/EDTA Shen Dian と division drawing telecentric method に よ っ て adjustment し た silkworm midgut か ら Brush border membrane vesicle (BBMV) を adjustment し, SDS-P AGEによる片の后、ウエスタンブロットしsotto originのdelta-エンドトキシンとのバインデAnalysis of the origin of ィングアッセイによるによって and BBMV A few つかの画のバンドとバインディングがcognizeめられた.その中でも事130kdal のバンドに强いバインディングがcognize められたので、そのバンドの片をSDS-ポリカクリルアミドゲルから车り出して电気动的にその片のペプチドをrecycled した. delta-エンドトキシンとをco-inc ubateし十十にそのペプチドとdelta-エンドトキシンとバインディングさせた后、ウェスタンブロットしたBBMV division painting とのバインディングアッセイを行ったところ, バインディングが取さえられていることが明らかとなった.よって, silkworm midgut BBMV をSDS-PAGE によって divide draw して, ゲルからrecycle し, そのrecycle したdraw をマウスにsubcutaneous vaccination してnow immunize している.それによって got られたantibody を いて, silkworm BBMV とsotto origin のdelta-エンドトキシンとのバインディングを hindering することができるかを正かめるつもりである.

项目成果

中谷育弘: "Bacillus thuringiensis subsp.wuhanensis cryIA(b)遺伝子の構造解析ならびに殺虫活性" 日本蚕糸学雑誌. 63 (印刷中). (1994)

Ikuhiro Nakatani：“苏云金芽孢杆菌武汉亚种cryIA(b)基因的结构分析和杀虫活性”，《日本血清学杂志》63（出版中）。