权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

卵管由来因子とマウス初期胚の発生過程に形成されるGap Junctionについて

关于早期小鼠胚胎发育过程中形成的输卵管衍生因子和间隙连接

基本信息

批准号：
05760211
负责人：
南直治郎
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05760211/
关键词：
マウス初期胚卵管因子 Gap Junction 発生 Connexin43 in situハイブリダイゼーション

项目摘要

マウスの初期胚の体外発生において、受精後約55時間前後に卵管の影響を受けた胚と受けていない胚では胚盤胞期への発生率に大きな差が認められ、また4細胞期に発生した胚においても割球間の接着性に大きな違いが認められる。卵管由来物質はマウス胚が2細胞期から4細胞期へ以降する時期に特異的に作用していることから、この時期以降に各割球間に形成され情報伝達に関与するgap junction との関連について検討した。ラットの心臓組織からAGPC法により全mRNAを抽出し、connexin43のcDNAから選択したDNA配列のセンス側にEcoRl、アンチセンス側にBamHlの制限酵素サイトを付加したプライマーを用いてRT-PCRを行い、目的とする約660bpのDNAを増幅した。増幅したDNAをBluescriptベクターに挿入後、大腸菌を用いて大量培養し、目的のcDNAを用いてハイブリダイゼーション用のプローブを作製した。プローブは、非放射性物質であるディゴキシゲニンで標識した。プローブが正確に作製できたかどうかについてはブロット法を用いナイロンメンブレン上にconnexinDNAを吸着させてハイブリダイゼーションし、アルカリフォスファターゼにより検出しプローブの作製・精製を確認した。また、卵管の影響下で発生した4細胞期胚は、パラフォルムアルデヒドで固定した後、LR Gold樹脂で包埋し、ウルトラミクロトームを用いて約1mumの切片を作製した。作製した切片をカバーグラス上でin situハイブリダイゼーションし、FITCで蛍光ラベルした抗ディゴキシゲニン抗体を用いて検出を試みたが、蛍光顕微鏡による観察ではFITCを検出することができなかった。ハイブリダイゼーションの過程で、切片がカバーグラスから剥がれ落ちることがしばしば観察され、最終的にハイブリダイゼーションによる検出ができなかったと考えられるため、切片のカバーグラスへの吸着方法について検討する必要があると思われる。

At the early stage of pregnancy, the embryos were born in vitro, and about 55 hours before and after fertilization, the blastocyst rate of the embryos in the cell stage was much higher than that in the 4-year-old stage, and that in the 4-cell stage. When the oviduct comes from, the second cell stage, the fourth cell stage, and the second cell stage, the second cell stage, the fourth cell stage, the second cell stage and the fourth cell stage. In this paper, we use the AGPC method to determine the full mRNA extraction, the connexin43 cDNA to select the DNA to configure the EcoRl, the BamHl to make the enzyme restriction, the RT-PCR to be used, and the 660bp to determine the size of the device. After the introduction of the DNA Bluescript, the bacteria were cultured in large quantities, and the purpose of the cDNA was to use the fish to make the bag. Non-radioactive materials, non-radioactive materials, and non-radioactive materials. Please make sure that you can make sure that you do not know what to do. You can use the connexinDNA to make sure that you are aware of the situation. After the oviduct and oviduct were fixed, the LR Gold fat was embedded, and the 1mum section was used to make the embryo. In this paper, we use the in situ slices, the FITC slices, the anti-antibodies, and the micrometers to observe that the FITC is out of the window. The procedure, the section, the process, the section, the section and the section.