エンドセリン変換酵素によるエンドセリン産生制御
通过内皮素转化酶控制内皮素的产生
基本信息
- 批准号:05770061
- 负责人:
- 金额:$ 0.58万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1993
- 资助国家:日本
- 起止时间:1993 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
エンドセリン変換酵素の精製をさらに進め、エンドセリン変換酵素に対するモノクローナル抗b体の作成を試みた。まず精製材料として血管内皮細胞を培養し、エンドセリン変換酵素が酸性糖蛋白質であることを利用して、レクチンカラムや陰イオン交換カラム等を用いたクロマトグラフィーにより精製を行った。エンドセリン変換酵素の活性はビッグエンドセリン-1を基質として、酵素反応により産生されるエンドセリン-1を酵素免疫測定法により測定した。精製したエンドセリン変換酵素を抗原としてマウスに注射し、モノクローナル抗体を作成を試みた。モノクローナル抗体のスクリーニングは抗体がエンドセリン変換酵素を免疫沈降する能力があるか否かで行った。スクリーニングによりエンドセリン変換酵素を免疫沈降する抗体を得た。この抗体は血管内皮細胞膜分画中の130 kDaの蛋白質を認識していた。得られた抗体を利用してエンドセリン変換酵素の細胞内分布,組織内分布,生理的,病態生理的な活性の変動について検討を加えているところである。一方、エンドセリン変換酵素を欠損した細胞に外来性に遺伝子を発現し、エンドセリン変換酵素を獲得したか否かをみることでスクリーニングを行い、発現クローニングも同時に行った。まず変換酵素欠損細胞にプレプロエンドセリンのcDNAを安定発現させることにより、ビッグエンドセリンを発現する細胞株をつくった。この細胞に内皮細胞cDNAライブラリー、あるいは染色体遺伝子断片を導入した。細胞がエンドセリンを産生するようになったかどうかをReverse hemolytic plaque assayという新しい方法を用いて決定した。現在陽性クローンを得、cDNAクローニングの作業が進行中である。
The anti-b antibody was tested by the enzyme assay, the enzyme assay and the antibody assay. The cells of vascular endothelium were cultured, and the enzyme acid glycoprotein was used in the culture of vascular endothelial cells. The enzyme activity was detected by enzyme immunoassay, and the enzyme activity was determined by enzyme immunoassay. The enzyme antigen was injected and the antibody was used to make the test. I don't know. I don't know what to do. The enzyme was immunized and the antibody was obtained. Antibody "vascular endothelium" cell membrane splicing in 130 kDa proteins. The antibody was obtained by using the intracellular distribution, tissue distribution, physiological and pathophysiological activity of the enzyme in the cell, tissue, physiology and physiology. On the one hand, the exogenous enzyme is not present in the cell, and the exogenous enzyme is not present in the first part. on the other hand, if the enzyme is not present in the cell, the extraneous enzyme is present, and the exogenous enzyme is not present. There is no enzyme in the cell. The cell strain is not stable. The cDNA is stable and stable. The endothelial cells, the cDNA cells, the chromosomal fragments, the endothelial cells, the chromosomal fragments. The new method is to determine the value of the new method by using the Reverse hemolytic plaque assay method. At present, we are in the process of sexual success and cDNA operation is in progress.
项目成果
期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
沢村逹也: "エンドセリン" 生体における情報伝達 南江堂. 71-75 (1993)
Tatsuya Sawamura:“内皮素”在生物体中的信息传递 Nankodo 71-75(1993)。
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