遺伝子操作によるウェルシュ菌alpha毒素の構造と生物活性

基因工程产气荚膜梭菌α毒素的结构和生物活性

• 批准号: 05770200
• 负责人: 永浜 政博
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tokushima Bunri University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770200/
• 关键词: ウェルシュ菌; alpha毒素; ホスホリパーゼC; 亜鉛; alpha毒素遺伝子; ヒスチジン残基; 変異毒素; リガンド

ウェルシュ菌のalpha毒素は、致死、壊死、溶血、ホスホリパーゼC(PLC)活性を有し、本菌によるガス壊疸の起病因子であると考えられている。本毒素は、分子内にZnを有し、このZnが、活性発現と密度に関連していると推察されている。今回、alpha毒素遺伝子を用いて部位特異変異法によりZnのリガンドであると考えられている126、136、148番目のヒスチジン(His)残基を中性アミノ酸であるグリシン、アラニン、ロイシンに置換したH126G、H136A、H148Lを作成し、構造と毒素活性の関係を検討した。作成した変異alpha毒素とインタクト毒素は枯草菌で発現させ、精製した。これらの変異alpha毒素とインタクト毒素の活性を比較するとH126Gは、溶血、Egg yolk、致死、スフィンゴミエリンナーゼ活性が、インタクト毒素の1/50〜1/100に減少し、H136AとH148Lは、いずれの活性も全く示さなかった。一方、3種類の変異毒素とインタクト毒素はオクタロニ-法で、抗alpha毒素血清との間に、一本のfuseした沈降線を形成し、また、トリプシンによる部分加水分解でも、変異毒素とインタクト毒素は、SDS-PAGEで同じ切断パターンを示した。これらのことから、これらのアミノ酸残基の変異によるalpha毒素の構造変化は、ほとんどないと考えられる。次に、各変異毒素とインタクト毒素のZn含量を原子吸光分光度計を用いて測定すると、H126G、H136G、そして、インタクト毒素は、分子当り、2個のZnを含有するの対して、H148Lは、1個のZnのみを含有することが判明した。以上から、置換された126、136、148位のHis残基は、いずれも、毒素活性発現に重要であることが判明した。さらに、148位のHis残基は、毒素に強固に保持されている2個のZnの1個のZnの重要なリガンドであることが判明した。

Alpha toxin, lethality, death, hemolysis, antifungal activity of C (PLC), pathogen of jaundice, pathogen of jaundice. The toxin, intramolecular Zn, Zn, and activity show that the density of the toxin is different from that of the molecule. This time, the alpha toxin was made from H126G, H136A, H148L by site-specific method, and the toxin activity was determined by using the method of site-specific analysis. 126,136,148 orders were used to determine the activity of alpha toxin. (His), neutral acid, H126G, H136A, H148L. Make alpha toxin, toxin, Bacillus subtilis, Bacillus subtilis. The activity of alpha toxin is less than that of H126G, hemolysis, Egg yolk, death, hemolysis, hem One party, three kinds of toxins, antitoxins, antitoxins, antitoxins The acid residues, the alpha toxins, the chemical compounds, the acid residues, the acid residues and the toxins. The Zn content of each toxin was determined by atomic absorption spectrophotometry, H126G, H136G, H136G, H126G, H126G, H136G, H126G, H136G, H126G, H126G, H136G, H136G, H126G, H126G, H136G, H126G, H126G, H The position 126,136,148 of His residues, antigens, and toxin activity were found to be important to identify the disease. Antigens, 148bp His residues, toxins fortified, two Zn and one Zn important genes were detected.