アポ蛋白E欠損症の遺伝子学的解析

脱辅基蛋白E缺乏症的遗传分析

• 批准号: 05770761
• 负责人: 塚本 和久
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770761/
• 关键词: アポ蛋白E; 遺伝子発現調節; CATアッセイ

III型高脂血症を発症した世界で3例目のアポ蛋白E(アポE)欠損症の患者の遺伝子解析を行ってきた。患者白血球由来のDNAからアポE遺伝子おクローニングし、アポEをコードする領域を含む約4700bpsの遺伝子配列を決定した結果、第2エクソンに一箇所、イントロンに十箇所の、野生型と異なる遺伝子配列を発見した。しかし、アポE遺伝子の発現調節に重要であると報告されている部位には配列異常は認めなかった。そこで、1)アポ遺伝子上流5kbpsをCATベクターに組み込んだベクターA、2)アポE遺伝子上流5kbpsを含み、かつアポE蛋白のほぼ全長の蛋白とCAT蛋白との融合蛋白を発現するベクターB、を作成しCAT活性にて発現量を調べた。ベクターAをマウスのモノサイト由来白血病細胞株THP-1細胞に導入した実験においては、野生型の遺伝子と比較して軽度の低下を認めたが、患者の病態を説明できる程度ではなく、またヒト肝芽腫細胞株由来のHepG2細胞を用いた場合には野生型との間にはほとんど差が認められなかった。ベクターBをHepG2細胞に遺伝子導入した結果、野生型ではCAT活性が存在するが欠損型ではCAT活性が全く消失していることを確認したため、欠損型と野生型のキメラを4種類作成し実験を行ったが、未だその責任領域を突き止めるところには至っていない。一方、第2エクソンの異常がこの患者にユニークなものか、単なる多型性によるものかを検索する目的で、正常日本人DNA15例と比較したところ、この異常は患者に特異なものであり、しかも患者においてはホモ接合体であることがほぼ確実となった。今後、1)アポE遺伝子をTHE-1細胞に導入し、発現するmRNA量をRT-PCR法にて野生型と比較し、また2)コスミドベクターを使用し更に上流部を含む遺伝子のクローニングを行ない、上流部の検索を行っていく予定である。

Analysis of 3 cases of type III hyperlipidemia and protein E deficiency syndrome in the world. The origin of the patient's white blood cells is the DNA of the からアポE legacy 伝子おクローニングし, the アポEをコードするfield をcontainsむの legacy of about 4700bps The result of the denim arrangement is determined, the 2nd エクソンに一箇sho, the イントロンに十箇所の, and the wild type とdifferent なる缝子 arrangement is を発见した.しかし, アポE伝子の発Now it is important to adjust the であると report and the されている parts of the にはalignment abnormality めなかった.そこで, 1) アポ伝子Upstream 5kbpsをCATベクターに组み込んだベクターA, 2) アポE伝子上Stream 5kbpsをincludingみ,かつアポE protein のほぼFull-length のprotein とCAT protein とのfusion protein を発appears するベクターB, をmade しCAT active にて発真人をadjusted べた. Introduction of THP-1 cells, a leukemia cell line derived from ベクターAをマウスのモノサイトした実験においては、Wild type の伝子とComparative して軽度のlow をcognitionめたが、Suffering HepG, which explains the degree of morbidity of the patient, and the origin of the hepatic budoma cell line 2 Cells are used in wild-type situations and are different from each other. As a result of the introduction of subtypes into HepG2 cells, the wild-type CAT activity was present and the CAT activity of the deficient type disappeared completely. There are 4 types of Confirmed したため, Defective type and Wild type のキメラを Made in し実験を行ったが、不だそのResponsibility area を出き出めるところには to っていない. On one side, the 2nd patient with an abnormality in the disease, a patient with an abnormality, a polymorphic polymorphism, a normal Japanese DNA 1 5 cases of comparative analysis of abnormal patients and specific cases of abnormality and abnormalityかもpatient においてはホモjoint body であることがほぼ真実となった. From now on, 1) Introducing into アポポ㼝子をTHE-1 cells, showing the amount of mRNA, RT-PCR method, wild type and comparison, また2 )コスミドベクターを use the upper part of the upper part of the む伝子のクローニングを行ない, the upper part of the upper part is の検SO を行っていく氧ある.

项目成果

Kazuhisa Tsukamoto: "Determination by PCR-RELP of Apo E genotype in a Japanese population" The Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 121. 598-602 (1993)

Kazuhisa Tsukamoto：“日本人群中 Apo E 基因型的 PCR-RELP 测定”《实验室与临床医学杂志》。