動脈硬化の発生・進展機序の解明に関する研究-未知の血管平滑筋細胞遊走因子の検索-

阐明动脉硬化发生、发展机制的研究 - 寻找未知的血管平滑肌细胞迁移因子 -

• 批准号: 05770792
• 负责人: 斉藤 能彦
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: National Cardiovascular Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770792/
• 关键词: 動脈硬化; 血管内皮細胞; 血管平滑筋細胞; 遊走因子

動脈硬化発生、進展機序の解明に関与する新しい因子を検索するに当たり、私は血管内皮細胞と血管平滑筋細胞の関連、特に平滑筋細胞の内膜側(内皮側)への遊走の重要性に注目し、血管内皮細胞培養上清から平滑筋細胞遊走因子を検索することにした。本年度は、前年度までに確立していた遊走活性の測定系の改良、および血管内皮細胞培養上清からの目的因子の部分精製に成功した。まず平滑筋細胞の遊走活性をより効率よく検出するための改良を行った。以前はクラボウ社製の遊走活性を測定するchamberを使用していたが、この方法は一つのchamberに使用する細胞が多く、また遊走してきた細胞の定量化する際にも細胞を染色し顕微鏡下で実際に勘定する必要があった。これらのため一回のアッセイで48chamber以上使用するのは実際的でなく未知の因子を検索していくための測定法としては不十分であった。そこで新しくNcuroprobe社製の96-wellmulti-chamberを導入した。この装置は少量の細胞で測定ができるほか、遊走してきた細胞の定量化する際にも市販のELISAリーダーを応用することが可能で、飛躍的効率化され、一度に150サンプル以上処理することが可能となった。血管内皮細胞培養上清を大量に処理して血管平滑筋細胞の遊走活性で部分精製を試みると、強力な遊走を活性を認めたが、以前の報告のようにこの半分以上は血小板由来成長因子(PDGF)に起因するものであった。しかし、PDGFを含まない分画にも遊走活性を認めた。この分画の活性をさらに検討すると非活性はPDGFと同等かそれ以上であることを確認した。今後はこの物質を単離同定する予定である。

The explanation of the mechanism of arteriosclerosis development and progression is related to the relationship between new factors, vascular endothelial cells and vascular smooth tendon cells, and special flattening. The intimal side (endothelial side) of smooth tendon cells is of great importance for migration, and the culture supernatant of vascular endothelial cells is used for smooth tendon cell migration factors. This year and the year before, we had successfully established an improved measurement system for the migration activity of our vascular endothelial cells, and successfully purified part of the target factor from our vascular endothelial cell culture supernatant. The migration activity of smooth tendon cells and the efficiency of smooth muscle cells are improved by improving the efficiency of smooth muscle cells. In the past, the migratory activity chamber manufactured by はクラボウ Corporation was measured using the していたが and このmethod of は一つのchamber. Quantitative determination of the necessary cells was carried out by staining the cells and the wandering cells and staining the cells under a microscope.これらのため一码のアッセイで48chamber and above use するのは実记The unknown factor を検SO していくためのdetermination method is not very good.そこで新しくNcuroprobe Co., Ltd. の96-wellmulti-chamberをImported した. This device is used to measure a small amount of cells and quantify wandering cells. It is a commercially available ELISA. It is possible to use することがで, to improve efficiency by leaps and bounds, and to handle 150サンプル or more at one time, it is possible となった. The culture supernatant of vascular endothelial cells was treated with a large amount of water, and the migration activity of vascular smooth tendon cells was partially purified, and the migration activity of the vascular smooth muscle cells was tested. The cause of platelet-derived growth factor (PDGF) is more than half of the previous report.しかし, PDGF をcontaining まない draw にもwandering activity を recognize めた.この画のACTIVE をさらに検曰するとINACTIVE はPDGFとEQUAL かそれ であることをCONFIRM した. From now on, the material will be separated and determined.