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遅発生神経細胞壊死における酵素組織化学的研究-細胞内情報伝達系、エネルギー産生系、細胞異変系に関して-

迟发性神经元坏死的酶组织化学研究 - 关于细胞内信息转导系统、能量产生系统、细胞异常系统 -

基本信息

批准号：
05771033
负责人：
小黒恵司
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

短時間脳虚血後の海馬における遅発生神経細胞死の原因につき、引き続き酵素組織化学的に検討した。実験はこれまで通り砂ネズミの両側総頸動脈の5分間間紮モデルを用いて行い、以下の結果を得た。1.これまでの中心課題である錐体細胞原形質膜Ca^<2+>-ATPaseとミトコンドリアcytochromec oxidase 活性の変化につき更に詳細な検討を加えた結果、海馬CA1領域において前者では、血流再開後6時間後という早期から活性が減弱するのと対照的に、後者では血流再開後3日目まで活性を保ち、その後減弱してゆくことが明らかになった。即ち、原形質膜Ca^<2+>-ATPaseの早期からの減弱により細胞内Ca^<2+>濃度は増加方向に傾くが、ミトコンドリアにおけるCa^<2+>緩衝機構の働きにより、netの細胞内Ca^<2+>濃度が虚血後3日目までは増加せず、その後のcytochromecoxidase 活性の減弱に対応した細胞内Ca^<2+>濃度の増加により、遅発生に細胞死が起こるものと考察された。2.錐体細胞原形質膜におけるguanylate cyclase および5′-uncleotidase の短時間脳虚血に伴う活性変化について検討した結果、少なくとも短時間脳虚血直後には両酵素とも減弱していることを明らかにした。しかし、本現像はこれまで検索したいずれの酵素でも見られるものであり、血流遮断による膜機能の一時的停止に伴う普遍的なものと考えられる。両酵素のその後の変化については更に検討中である。本年度は新たに、遅発生神経細胞死におけるCa^<2+>-ATPaseの免疫組織化学的変化を検討することを目的に、Ca^<2+>-ATPaseの抗体作成に着手した。即ち、Penninston らの方法によりヒト赤血球膜を可溶化し、カルモジュリンカラムを用いてCa^<2+>-ATPaseを抽出する作業である。しかしながら、本作業によって得られるCa^<2+>-ATPase蛋白の収率は著しく低く、今後多くの時間を要する見込みである。

A study on the causes of neuronal death in hippocampus after short-term blood deficiency The following results were obtained from the 5-minute interval of the carotid artery in the middle of the test. 1. The central topic of this study is the change of cytochrome oxidase activity in protoplasma membrane Ca^<2+>-ATPase of pyramidal cells. The results show that the activity of Ca ^<2 +>-ATPase in protoplasma membrane of pyramidal cells decreases 6 hours after reopening of blood flow, while that of Ca ^<2 +>-ATPase in protoplasma membrane of pyramidal cells decreases 3 days after reopening of blood flow. That is, the decrease of protoplasma Ca^<2+>-ATPase activity in the early stage of the process, the increase of intracellular Ca^<2+> concentration in the direction of the increase of intracellular Ca^<2+> concentration, the decrease of intracellular Ca^<2+> concentration in the process of the buffer mechanism, the increase of intracellular Ca^<2+> concentration in the process of the decrease of cytochromecooxidase activity in the process of the decrease of intracellular Ca^<2+> concentration in the process of the decrease of intracellular Ca ^<2+> concentration in the process of the decrease of intracellular Ca ^<2+> concentration in the process of the decrease of intracellular Ca ^<2 +>-ATPase activity in the process of the decrease of intracellular Ca^<2+> concentration in the process of the decrease of intracellular Ca^<2+> concentration in the process of the process of the decrease of intracellular Ca ^<2+> concentration in the process of intracellular Ca ^<2+> concentration. The first cell death occurred in 1989. 2. Pyramid cell protoplast guanylate cyclase and 5′-uncleotidase are activated in a short period of time, resulting in a decrease in the activity of the enzyme in a short period of time. This phenomenon is caused by the temporary cessation of membrane function, which is accompanied by the general cessation of membrane function. The enzyme changes after it changes. This year, we started to study the expression of Ca^<2+>-ATPase in human brain cells by immunohistochemistry, and to prepare antibodies against Ca^<2+>-ATPase. That is, Pennington's method of solubilizing red blood cell membranes and extracting Ca^<2+>-ATPase from them The rate of Ca^<2+>-ATPase protein production in this work is low and will be required for many years to come.