Porphyromonas gingivalisの線毛遺伝子不活化株の作製と線毛機能の解明

牙龈卟啉单胞菌菌毛基因灭活菌株的创建及菌毛功能的阐明

• 批准号: 05771499
• 负责人: 浜田 信城
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kanagawa Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771499/
• 关键词: Porphyromonas gingivalis; 線毛遺伝子不活化株; fimAmutant; 線毛; fimA

Porphyromonas gingivalisの線毛は、口腔内定着に関与する因子と考えられているがその病原的意義については明確ではない。本研究では、P.gingivalis線毛の機能を明確にすることを目的としてATCC33277株を用いて線毛欠損株を作製し、その性状を検討することにより以下の結果を得た。1.線毛遺伝子不活化株の作製について:P.gingivalis381株由来の線毛遺伝子fimAを含むプラスミドpUC13Bg12.1のfimA内に薬剤耐性遺伝子であるプラスミドpE5-2のEcoRIフラグメント(Tc^r/Cc^r-Em^r)を挿入して線毛遺伝子を不活化した後、大腸菌に形質転換した。形質転換株をアンピシリンとテトラサイクリン含有培地で選択した後、Em^r遺伝子を含む不活化されたfimA遺伝子を切り出し、suicide vector pGP704に挿入してpKDH1を作製した。このプラスミドが複製できる大腸菌SM10lambdapir株に形質転換後P.gingivalisATCC33277株に接合伝達を行いfimA遺伝子の相同的組み換えによる線毛遺伝子不活化株(MPG1)が作製できた。2.性状検索について:線毛遺伝子不活化株MPG1において、fimA遺伝子の破壊されていることがサザンハイブリダイゼーションにより確認された。また、電子顕微鏡観察において親株であるP.gingivalisATCC33277株に特有の長い線毛構造物は認められなかった。同時に、43K線毛タンパク質の消失がSDS-PAGEでも認められた。さらに、ウエスタンブロティングにおいても抗381線毛モノクローナル抗体との反応は認められなかった。これらの結果から、線毛遺伝子であるfimAの欠損株が作製されたものと考えられる。この変異体では血球凝集能及び菌体表層の疎水性に関しては、親株と差異は認められなかったが、上皮細胞や線維芽細胞への付着に関して顕著な差異が認められた。

The meaning of the pathogen of the disease is clearly defined by the definition of the pathogen in the Porphyromonas gingivalis and the oral cavity. In this study, P.gingivalis wool machine can clearly verify that the purpose of this study is to verify that the ATCC33277 plant is used as a trait, and the results show that the following results have been obtained. 1. The inactivated strain of the P.gingivalis381 strain was used as an inactivating strain. The P.gingivalis381 strain was isolated from the fimA. After the strain was inactivated, the fungus was found to be in the shape of the fungus after it was introduced into the pE5-2 EcoRI strain. The shape of the plant is not activated, the fimA is cut out, and the suicide vector pGP704 is entered into the pKDH1 to make a cut. After the inoculation of SM10lambdapir strain, the inoculation of P.gingivalisATCC33277 strain reached the same level as that of fimA strain. The inactivated strain (MPG1) was used as an antifungal agent. two。 Characters: the inactive plants of MPG1 and fimA were not activated. They were broken and broken. Microphones and electronic microscopes are used to observe the characteristics of the P.gingivalisATCC33277 plant, which is unique to the long-term plant. At the same time, at 43K, the SDS-PAGE will disappear at the same time. Tell me, tell me, tell me something, say something, say something about it, say something about it. The results of this study show that there is a shortage of fimA and that there is a lack of information on the results. The ability of hemagglutination and the ability of bacteria to agglutinate, strain, cell line, epithelial cell line and cell line of bacteria were detected.