多剤耐性タンパク質(P-糖タンパク質)の生化学的研究

多药耐药蛋白（P-糖蛋白）的生化研究

• 批准号: 05771763
• 负责人: 甲斐 大達
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771763/
• 关键词: P-糖タンパク質; Na^+,K^+-ATPase; BIPM; FITC; トリプトファン残基; リン脂質

多剤耐性タンパク質(P-糖タンパク質)のATPaseとしての基本的な性質を理解する一環としてNa^+,K^+-ATPaseの酵素化学的性質を研究し以下の結果を得た。N-[p-(2-benzimidazolyl)pheny]maleimide(BIPM)とfluorescence isothiocyanate(FITC)でそれぞれCys-964とLys-501を修飾したNa^+,K^+-ATPaseをphospholipase A_2や蛍光消光剤で処理し反応中間体形成に伴うBIPM probe、FITC probe、トリプトファン残基とATPaseに含まれるリン脂質の相互作用を解析した。反応中間体形成にともない、リン脂質の炭化水素鎖とBIPM probe、FITC probe、トリプトファン残基の相互作用が変化すること及び消光剤による消光の程度が異なることが示された。これらのことより、Cys-964とGlu-953は酵素の比較的表層近くにあり、Thr-955とSer-962は酵素の比較的中心近くにあるということが示唆された。また、Na^+,K^+-ATPase標品を用いたBIPM probeからFITC probeへの蛍光エネルギー移動をアセチルリン酸を用いて解析したところ、CyS-964に結合しているBIPM probeとLys-501に結合しているFITC probeの間の距離は約36Åと推定された。今後、さらにいくつかの基礎実験を重ねたうえで多剤耐性タンパク質(P-糖タンパク質)に関する生化学的研究を進めたいと考えている。

The basic understanding of ATPase tolerance enzyme chemistry of Na ^ +, K ^ +-Na ^ + was studied. The following results were obtained. N-[p-(2-benzimidazolyl) pheny] maleimide (BIPM) fluorescence isothiocyanate (FITC) "Lys-501" modifies Na ^ +, K ^ +-ATPase "phospholipase A" 2 "extinction" chemical reaction "body formation" in "companion" BIPM probe, FITC probe, "residue" ATPase "contains"lipid" interaction "analytical". In the reverse phase, the body is formed, the carbonized water, the BIPM probe, the FITC probe, the residue interaction, the chemical interaction, the extinction degree and the extinction degree are shown. The tables of Cys-964 Glu-953 enzymes, Thr-955 enzymes and Ser-962 enzymes show that the center of the enzyme ratio is close to the center of the index. The BIPM probe, Na ^ +, K ^ +-ATPase labels are used to determine the distance between the BIPM and the FITC probe, and the distance between them is about 36 years. In the future, we will make further progress in the study of biochemistry in the field of biochemistry.

项目成果

Yousuke Nakamura: "Different Susceptibility to Phospholipase A_2 Trcatment of the Fluolescence Intensity Changes in the Vicinity of Cys-964 and Lys-501 in the alpha-Chain of Probe Labeled Na^+,K^+-ATPase" Journal of Biochemistry. 115. 454-462 (1994)

Yousuke Nakamura：“对磷脂酶 A_2 的不同敏感性对标记 Na^ ,K^ -ATP 酶的探针 α 链中 Cys-964 和 Lys-501 附近荧光强度变化的处理”《生物化学杂志》。

K.Taniguchi: "Changes in the Conformational State of Probe-Labeled Na^+/K^+-ATPase in Real Time" THE SODIUM PUMP. (in press). (1994)

K.Taniguchi：“探针标记的 Na^ /K^ -ATP 酶构象状态的实时变化”钠泵。