Development of new Na,K-ATPase inhibitor and the study of its reaction mechanism

研究分担者は(+)-laurenidificin、(-)-aplysiallene、(±)-aplysiallene、ブロモジエン部分の幾何異性体である(-)-及び(±)-bromodiene isomerを合成し、研究代表者に提供した。研究代表者は、これらの物質のラット及びウサギの脳Na,K-ATPaseに対する作用を解析して、既知の阻害薬であるouabainやbufadienolides作用と比較した。これらの結果を論文にまとめて公表する予定である。研究分担者は、上記の物質の合成以外に、H,K-ATPase阻害作用のあるminimiflorinの化学合成を開始した。H,K-ATPase阻害作用のある物質は、同じタイプのATPaseであるNa,K-ATPase活性も抑制する可能性が高く、Na,K-ATPase活性の調節に使用できる可能性があるからである。研究代表者は、合成物質の細胞毒性を検討するために神経系の細胞であるNeuro-2a細胞と、腎臓系の細胞であるHEK293細胞の培養を開始し、細胞数の計測から細胞毒性を解析する系を準備した。また、MTTアッセイにより毒性を解析する準備を行った。研究代表者は、サブタイプの異なるNa,K-ATPaseに対する合成物質の作用を検討するために、培養したNeuro-2a細胞とHEK293細胞を回収して、遠心分離操作によりミクロソーム分画を得た。Na,K-ATPase活性はミクロソーム分画に回収された。また、Na,K-ATPaseに近いP型ATPaseであるCa-ATPase活性もミクロソーム分画に存在した。今後、ミクロソーム分画を用いて、合成物質の各ATPaseに対する作用を解析することが可能となった。

研究分担者は(+)-laurenidificin、(-)-aplysiallene、(±)-aplysiallene、ブロモジエン部分の幾何異性体である(-)-及び(±)-bromodiene isomerを合成し、研究代表者に提供した。研究代表者は、これらの物質のラット及びウサギの脳Na,K-ATPaseに対する作用を解析して、既知の阻害薬であるouabainやbufadienolides作用と比較した。これらの結果を論文にまとめて公表する予定である。研究分担者は、上記の物質の合成以外に、H,K-ATPase阻害作用のあるminimiflorinの化学合成を開始した。H,K-ATPase阻害作用のある物質は、同じタイプのATPaseであるNa,K-ATPase活性も抑制する可能性が高く、Na,K-ATPase活性の調節に使用できる可能性があるからである。研究代表者は、合成物質の細胞毒性を検討するために神経系の細胞であるNeuro-2a細胞と、腎臓系の細胞であるHEK293細胞の培養を開始し、細胞数の計測から細胞毒性を解析する系を準備した。また、MTTアッセイにより毒性を解析する準備を行った。研究代表者は、サブタイプの異なるNa,K-ATPaseに対する合成物質の作用を検討するために、培養したNeuro-2a細胞とHEK293細胞を回収して、遠心分離操作によりミクロソーム分画を得た。Na,K-ATPase活性はミクロソーム分画に回収された。また、Na,K-ATPaseに近いP型ATPaseであるCa-ATPase活性もミクロソーム分画に存在した。今後、ミクロソーム分画を用いて、合成物質の各ATPaseに対する作用を解析することが可能となった。