単クローン抗体FU-MK-1の認識する新しい腫瘍関連抗原のcDNAクローニング

单克隆抗体 FU-MK-1 识别的新肿瘤相关抗原的 cDNA 克隆

• 批准号: 05772061
• 负责人: 荒川 文子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Fukuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05772061/
• 关键词: 単クローン抗体; FU-MK-1; GA733-2; CO17-1A; KSA; EGP

1.FU-MK-1抗体の認識する抗原の生化学的・免疫学的解析 種々のヒト樹立癌細胞FU-GC-16、MKN-74(胃癌)、QGP-1(膵癌)、HLC-1(肺癌)、CCK-81(結腸癌)、HepG2(肝細胞癌)を^<35>S-Met下で培養し、FU-MK-1抗体で免疫沈降反応後、SDS-PAGEを行ったところ、HepG2以外のCell lysateで約4lkDaに強いbandを得た。またtunicamycin処理で分子量が約35kDaに減少することにより、N-結合型糖鎖が2〜3本存在すると考えられた。免疫組織化学的には、胃正常粘膜と反応せず、ほとんどの消化管癌に反応すること、さらに正常肝細胞と肝細胞癌とは反応しないことが既に報告されている。以上より、FU-MK-1抗体の認識する抗原が既報の癌関連抗原GA733-2であると推測された。この抗原は、単クローン抗体CO17-1Aが認識する抗原で、ほとんどの消化管癌に高く存在し、分子量約40kDaの細胞膜上の糖蛋白であり、既にmolecular cloningされ、314個のアミノ酸を持ち、可能なN-結合型糖鎖部位を3ケ所有する膜貫通型蛋白であると推定された(Szala,S.et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA87,3542-3546,1990)。また、すでに報告された腺癌関連抗原KSAや上皮糖蛋白抗原EGPとも同一であった(Simon,B.et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA87,2755-2759,1990)。2.FU-MK-1抗体と癌関連抗原GA733-2との反応性 GA733-2の塩基配列を基に、coding regionをはさむ2つのoligonucleotide primerを合成し、QGP-1 poly(A)^+RNAを用いてRT-PCRを行ない、約1kbpの増幅bandを得た。塩基配列を確認後、このcDNAを発現vector pSG5に挿入し、COS-1細胞にtransfectionした。発現蛋白GA733-2とFU-MK-1抗体の反応性の解析は上記1と同様に行ない、約41kDaにbandを認めた。これによりFU-MK-1抗体の認識する抗原がGA733-2であると確認された。3.今後の研究計画 FU-MK-1抗体が認識する抗原エピトープの解析とGA733 gene familyであるGA733-1抗原との反応性の解析を行なう。

1. Identification of FU-MK-1 Antigen Biochemical and Immunological Analysis of FU-MK-1 Antibodies; Establishment of Tumor Cells FU-GC-16, MKN-74(Gastric Cancer), QGP-1(Gastric Cancer), HLC-1(Lung Cancer), CCK-81(Colon Cancer), HepG2 (Hepatocellular Carcinoma)<35>; The molecular weight decreased from about 35kDa to 2 ~ 3 kDa due to the treatment of tunicin. Immunohistochemical examination of normal gastric mucosa, gastrointestinal carcinoma, hepatocellular carcinoma, and normal liver tissue was performed. The above results suggest that FU-MK-1 antibody is a reported cancer-associated antigen GA733 -2. The antigen, antibody CO17 -1A, is recognized as an antigen and is highly present in digestive tract cancer. A glycoprotein with a molecular weight of about 40kDa is present on the cell membrane. It is molecular cloning, 314 amino acids, and possibly N-binding glycosites. All membrane-penetrating proteins are putative (Szala, S. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 3542 - 3546, 1990). Adenocarcinoma-associated antigen KSA and epithelial glycoprotein antigen EGP were reported (Simon, B. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 2755 - 2759, 1990). 2.FU-MK-1 antibody was synthesized by RT-PCR with a 1kbp amplified band in the coding region of GA733 -2 and its anti-GA733 -2 motif. After gene alignment was confirmed, the cDNA was detected in vector pSG5 and COS-1 cells. Analysis of the antigenicity of GA733 -2 and FU-MK-1 antibodies The antigen GA733 -2 was recognized by FU-MK-1 antibody. 3. Future research projects FU-MK-1 antibody recognition, antigen analysis and GA733 gene family analysis, GA733-1 antigen analysis