プルニルトランスフェラーゼ反応におけるイソプレノイド鎖長制御機構

普鲁基转移酶反应中的类异戊二烯链长控制机制

• 批准号: 05780429
• 负责人: 大沼 信一
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780429/
• 关键词: プレニルトランスフェラーゼ; ゲラニルゲラニルニリン酸; ゲラニルゲラニルニリン酸合成酵素; イソプレノイド

プレニルトランスフェラーゼはイソペンテニル二リン酸(IPP)とアリル性プライマー基質の連続的縮合反応を触媒する酵素の総称で、これまでに縮合の際に生成する二重結合の立体化学と生成物の鎖長の違いにより10数種類の酵素が発見されている。これらの酵素はそれぞれ決まった鎖長の生成物を与えるが、いかにしてこの成長鎖長が決定されているかについては不明の点が多い。そこで報告者はプルニルトランスフェラーゼの一つであるゲラニルゲラニルニリン酸合成酵素遺伝子を単離し、遺伝子組換え技術を利用し人工酵素を作成し、これらを用いて反応機構特に鎖延長機構について検討した。1、ゲラニルゲラニルニリン酸合成酵素遺伝子のクローニング高度好熱性古細菌Sulfolobus acidocaldariusのゲラニルゲラニルニリン酸合成酵素は細胞膜合成に関与している重要な酵素である。この遺伝子を単離するために、カロチノイド生合成に関与する遺伝子crtI、crtBを発現させた大腸菌を作成し、この菌の中でゲラニルゲラニルニリン酸合成酵素が発現した場合、菌体内に赤色のリコペンが生成し視覚的に確認できる系を作成した。この系を用いてS.acidocaldariusの遺伝子ライブラリーをスクリーニングしゲラニルゲラニルニリン酸合成酵素遺伝子を単離した。この遺伝子から本酵素は330アミノ酸からなる酵素で、既にクローニングされている他のプルニルトランスフェラーゼと相同性を持つことが分かった。また大腸菌で発現させた本酵素の性質を調べたところ非常に耐熱性であることが分かった。2、人工ゲラニルゲラニルニリン酸合成酵素の作成上記遺伝子に変異を導入したくさんの人工ゲラニルゲラニルニリン酸合成酵素を作成し酵素活性について検討したところ幾つかの人工酵素で生成物の鎖長が短くなっていることが分かった。現在これらの原因について検討している。

The enzyme synthesis, stereochemistry of double bonds and locking reaction of products produced during condensation, and the enzyme development of more than 10 kinds of enzymes were found in the reaction system of IPP and IPP. This enzyme is determined by the length of the lock product and the length of the lock. The authors of this report are interested in the use of artificial enzymes for the production of enzymes and in the use of reverse osmosis mechanisms for the extension of mechanisms for the detection of enzymes. 1. The enzyme of acid synthase is an important enzyme related to cell membrane synthesis. The gene expression system is established in E. coli, in which the gene expression system is established in the presence of an acid synthase, in the presence of an enzyme, in the presence of an enzyme. This system uses S.acidocaldarius as a vector for the synthesis of amino acids. This enzyme is 330 years old, and its identity is different from that of other enzymes. E. coli is found to be very resistant to heat. 2. The artificial enzyme of acid synthase is introduced into the artificial enzyme of acid synthase to make the enzyme activity. Now, the reason for this is that we're going to have to deal with it.

项目成果

Shih-ichi Ohnuma: "Alteration of the Product Specifities of Prenyltrans Ferases by Matal lous" Biochemical and Biophycical Resewrch Communica tions. 192. 407-412 (1993)

Shih-ichi Ohnuma：“Matal lous 对异戊二烯基反式酶的产品特性的改变”生物化学和生物物理学研究通讯。

Shih-ichi Ohnuma: "Solanesyl Diphosphate Synthase Reaction with Artificiial Substrates.Formation of R and S-Enantiomers of 4-and 8-Methyl Derivatives of Gerauyl gerauyl Diphosphate" Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 3. 2733-2738 (1993)

Shih-ichi Ohnuma：“茄尼基二磷酸合酶与人工底物的反应。香叶基香叶基二磷酸的 4-和 8-甲基衍生物的 R 和 S-对映体的形成”生物有机