分子進化工学的手法を用いたプレニルトランスフェラーゼの鎖延長機構の解明

利用分子进化工程方法阐明异戊烯基转移酶的链延长机制

• 批准号: 07780489
• 负责人: 大沼 信一
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780489/
• 关键词: イソプレノイド; ファルネシル二リン酸合成酵素; ゲラニルゲラニル二リン酸合成酵素

イソプレノイドの生合成に関与しているプレニルトランスフェラーゼは、イソプレニル二リン酸(IPP)とアリル性プライマー基質の連続的縮合反応を触媒する酵素の総称であり、生成物の鎖長により分類され、これまでに10数種類が知られている。しかしこれら個々の酵素が如何にして生成物の鎖長を決定しているかについては全く不明である。そこで、今回、鎖長決定機構を解明するために、ゲラニルゲラニル二リン酸合成酵素やファルネシル二リン酸合成酵素などのプレニルトランスフェラーゼ遺伝子にランダムに変異を導入し、In vivo検出系を用いて最終生成物の変化した変異体を作製し、解析を行った。ファルネシル二リン酸合成酵素にランダム変異を導入しゲラニルゲラニル二リン酸合成酵素活性を持つ変異体をリコペン生産による大腸菌の着色を指標にしたシステムを利用し探索したところ4種類の変異体を得ることができた。これら変異型酵素を解析したところいずれもゲラニルゲラニル二リン酸合成酵素活性をIn vitroで示し、3つのアミノ酸が鎖長決定に重要な寄与をしていることが明らかになった。特に初めアスパラギン酸に富んだ領域の5残基上流に存在するチロシンが鎖長決定に直接的に寄与していることが判った。また、ゲラニルゲラニル二リン酸合成酵素にランダム変異を導入した場合にも幾つかのより長鎖の生成物を与える変異体が得られこれらの解析から上記アミノ酸がゲラニルゲラニル二リン酸合成酵素の場合にも重要な寄与をしていることを明らかにした。

In this paper, the synthesis and synthesis of synthetic enzymes and the production of synthetic enzymes are studied in this paper. in this paper, the synthesis and characterization of synthetic and synthetic enzymes are studied in this paper, the results show that the synthesis of enzymes in the synthesis and synthesis of synthetic enzymes and the production of synthetic enzymes are not only possible in the synthesis of synthetic enzymes, but also in the production of enzymes, such as the synthesis of synthetic enzymes, the production of synthetic enzymes, the synthesis of synthetic enzymes and the production of synthetic enzymes, the synthesis of synthetic enzymes and the production of high molecular weight (IPP). The enzyme enzymes are called enzymes, and the products are classified and analyzed. How do two enzyme enzymes determine that the product manager is responsible for the detection of unknown enzymes. This time, the Chief Executive has decided that the system is responsible for the production of dicarboxylic acid synthesis enzymes, the production of dicarboxylic acid synthesis enzymes, the production of dicarboxylic acid synthesis enzymes, the production of high-performance acid synthesis enzymes, the reduction of acid synthesis enzymes, and the production of high-performance acid synthesis enzymes. This time, the Chief Executive has decided that the system should use the most advanced products of the system to analyze and analyze the data of the system. In this paper, the activity of acid synthesis enzyme was detected in this paper. in this paper, the acid synthesis enzyme activity of acid synthesis enzyme was studied in this paper. in this paper, the acid synthesis enzyme activity of acid synthesis enzyme was detected in this paper. The activity of dicarboxylic acid synthesis enzyme is shown by In vitro assay, and the activity of dicarboxylic acid synthesis enzyme is determined by the determination of its importance. In particular, there is a direct decision to send and determine the value of the residue in the field of wealth. The synthesis of acid synthesis enzymes is very important in the analysis of acid synthesis enzymes, acid synthesis enzymes and acid synthesis enzymes.

项目成果

Shingo Fujisaki: "Cloning of a gene from Escherichia coli that confers resistanbce to fosmidomycin as a conseguence of auplification" Gene. (発表予定). (1996)

Shingo Fujisaki：“从大肠杆菌中克隆一个基因，该基因赋予对福米霉素的抗性，作为扩增的结果”基因（即将发表）。

Shinichi Ohnuma: "Identification and Charactrization of Geranylgeraniol Kinase and Geranylgeranyl Phosphate Kinase from the Archaebacterinm Sulfolobus acidocaldarius" Journal of Biochemistry. (発表予定). (1996)

Shinichi Ohnuma：“来自古细菌酸热硫化叶菌的香叶基香叶醇激酶和香叶基磷酸盐激酶的鉴定和表征”生物化学杂志（1996 年）。

Shinichi Ohnuma: "Conversion Flom Farnesyl Diphosphte Synthase to Gevnylgeranyl Diphosphate・synthase by Rardom Chemical Mutagensis" The Journal of Biological Chemistry. (発表予定). (1996)

Shinichi Ohnuma：“通过 Rardom Chemical Mutagensis 将 Flom Farnesyl Diphosphte Synthase 转化为 Gevnylgeranyl Dilicates·synthase”《生物化学杂志》（1996 年）。