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プロセシングプロテアーゼによるミトコンドリアタンパク質の延長ペプチド認識構造の解析

通过加工蛋白酶分析线粒体蛋白的延伸肽识别结构

基本信息

批准号：
05780459
负责人：
荻島正
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ミトコンドリアプロセシングプロテアーゼによる認識機構を明らかにするために、以下の研究をおこなった。(1)プロテアーゼ反応をリアルタイムで測定できる基質の開発。(2)基質と同様に酵素に結合するが、切断を受けず酵素と安定な複合体を形成する基質類似体の開発(1)リンゴ酸脱水素酵素の延長ペプチドをモデルとした合成ペプチドが、ミトコンドリアプロセシングプロテアーゼの基質となり正しい位置で切断を受けることを明らかにした。この合成ペプチドを修飾し、アミノ末端に蛍光基を、切断部位をはさんでカルボキシル末端側に消光基を導入した。その結果、蛍光基は延長ペプチド中の遠位のアルギニンよりもアミノ末端側に存在し、消光基はカルボキシル末端側の切断部位、すたわち、P1'から少なくとも3残基は離れていれば切断に伴い蛍光を発することが判明した。この基質は酵素反応をリアルタイムでしかも高感度に測定することを可能にした。この蛍光基質をさまざまに改変することで、基質認識における遠位および近位のアルギニン、P1'位のアミノ酸の重要性が判明した。(2)リンゴ酸脱水素酵素の延長ペプチド中のP1'位のアミノ酸をL-フェニルアラニンからD-フェニルアラニンへと置換させた。この基質類似体はプロテアーゼにより切断を受けなくなるばかりか、もとのペプチドやin vitroで合成した前駆体タンパク質の切断をも強く阻害した。この基質類似体を用いて酵素の部位特異的標識化などへの応用を現在準備している。

ミトコンドリアプロセシングプロテアーゼによるThe organization's research is based on the organization's research. (1) Determination of the irritation of the matrix of the プロテアーゼreverse をリアルタイムで. (2) The combination of matrix and homozygous enzymes and the formation of a stable complex by cutting the enzyme and the formation of matrix analogues (1) The extension of dehydratase enzymeチドをモデルとした合ペプチドが、ミトコンドリアプロセシングプロテアーゼの matrix となり正しい Position でcut off をReceived けることを明らかにした. The このsynthetic ペプチドをmodificationし, the アミノterminal light baseを, and the cutting part をはさんでカルボキシルterminal side に matting baseを introductionした.その result, は light base は extension ペプチド middle の far position のアルギニンよりもアミノ terminal side に presence し, extinction base はカルボキシル Terminal Side cutting part, すたわち, P1'から小なくとも3 residue は里れていれば cleavage and companion い蛍光を発することが clarified した.この matrix は enzyme reaction をリアルタイムでしかも high sensitivity に determination することをにした.この蛍主をさまざまに开変することで、strome recognition におけるFar position The importance of the near position of the およびのアルギニン and the P1′ position of the のアミノ acid is clearly understood. (2) The P1' position of the extended polypeptide in the リンゴ acid dehydrase enzyme is the のアミノ acidをL-フェニルアラニンからD-フェニルアラニンへと Replacement させた.このMatrix Analog Body はプロテアーゼにより Cut off をReceived けなくなるばかりか、もとのペプチドやin The synthesis of the in vitro material and the cutting of the material in the former body and the strong resistance of the material are done. The site-specific labeling of このmatrix analogues using いてenzyme is now being prepared.